Question

RNA前所用器皿的准备，普通枪头，怎样变成无酶的

Answer 1

金属、陶瓷器皿：200℃干热灭菌过夜。
枪头等经DEPC水浸泡后灭菌。

详细版本：
1、所有的组织中均存在RNA酶，人的皮肤、手指、试剂、容器等均可能被污染，因此全部实验过程中均需戴手套操作并经常更换（使用一次性手套）。
2、所用的玻璃或瓷器（如研钵）器皿需置于干燥烘箱中200℃烘烤2小时以上。凡是不能用高温烘烤的材料如塑料容器等皆可用0.1%的焦碳酸二乙酯(DEPC)水溶液处理，再用蒸馏水冲净。DEPC是RNA酶的化学修饰剂，它和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环反应而抑制酶活性。DEPC与氨水溶液混合会产生致癌物，因而使用时需小心。
3、试验所用试剂也可用DEPC处理，加入DEPC至0.1%浓度，然后剧烈振荡10分钟，再煮沸15分钟或高压灭菌以消除残存的DEPC，否则DEPC也能和腺嘌呤作用而破坏mRNA活性。
注意：DEPC能与胺和巯基反应，因而含Tris和DTT的试剂不能用DEPC处理。Tris溶液可用DEPC处理的水配制然后高压灭菌。
4、配制的溶液如不能高压灭菌，可用DEPC处理水配制，并尽可能用未曾开封的试剂。除DEPC外，也可用异硫氰酸胍、钒氧核苷酸复合物、RNA酶抑制蛋白等。此外，为了避免mRNA或cDNA吸附在玻璃或塑料器皿管壁上，所有器皿一律需经硅烷化处理。

DEPC配制：买来的DEPC是液体装， 取1ml DEPC 加至1000ml蒸馏水，该液体便可以用来浸泡RNA提取过程中所用的EP管，枪头等，需浸泡至少24小时，用时取出，高压15分钟以去除DEPC的毒性。如果是用来配制溶液，也是千分之一的浓度，充分混匀后高压待冷却后便可用于配制溶液。