Question

做组织样品的western blot的时候，处理样品有什么诀窍吗

Answer 1

做组织样品的western blot的时候

组织样品必须进行研磨、匀浆、超声处理。
蛋白质溶解度会更好，离心要充分，膜蛋白需用更剧烈的方法抽提，低丰度膜蛋白可能还要分步抽提(超速离心)。还有一点就是组织中的蛋白酶活性更强，需要注意抑制蛋白酶的活性(加入PMSF和蛋白酶抑制剂cocktail)，封闭剂一般5%脱脂奶粉较常用。如果一抗为多克隆抗体，使用BSA也是不错的选择。