Question

蛋白质N端和C端的测定方法是什么？基本原理是什么？

Answer 1

n端测序的原理
蛋白质和多肽n-端测序技术是以edman化学降解法为基础的，edman化学降解，其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的n-端残基的偶联，苯氨基硫甲酰酞（ptc-肽）环化裂解，和噻唑呤酮苯氨（atz）转化为苯异硫尿氨基酸（pth-氨基酸）三个主要的化学步骤，每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基，同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个edman降解，最后通过转移的pth-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。
蛋白质c端测序3种方法：化学法、羧肽酶法、及串联质谱法
其中后两者最近普遍应用的办法。
羧肽酶水解法：羧肽酶可以专一性地水解羧基末端氨基酸。根据酶解的专一性不同，可区分为羧肽酶a、b和c。应用羧肽酶测定末端时，需要事先进行酶的动力学实验，以便选择合适的酶浓度及反应时...n端测序的原理
蛋白质和多肽n-端测序技术是以edman化学降解法为基础的，edman化学降解，其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的n-端残基的偶联，苯氨基硫甲酰酞（ptc-肽）环化裂解，和噻唑呤酮苯氨（atz）转化为苯异硫尿氨基酸（pth-氨基酸）三个主要的化学步骤，每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基，同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个edman降解，最后通过转移的pth-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。
蛋白质c端测序3种方法：化学法、羧肽酶法、及串联质谱法
其中后两者最近普遍应用的办法。
羧肽酶水解法：羧肽酶可以专一性地水解羧基末端氨基酸。根据酶解的专一性不同，可区分为羧肽酶a、b和c。应用羧肽酶测定末端时，需要事先进行酶的动力学实验，以便选择合适的酶浓度及反应时间，使释放出的氨基酸主要是c末端氨基酸。
串联质谱法
串联质谱法原理：即在质谱中获得蛋白质肽段的碎片。肽段在质谱中的碎裂有一定规律，通常最容易断裂的是肽键位置，得到分别命名为b离子和y离子，得到这些离子的m/z的图谱，分析图谱得到的蛋白质的c端序列。