多克隆抗体与单克隆抗体有什么差异
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科研人员在western blot,COIP等涉及抗体方面的实验时,为了将感兴趣的蛋白以抗原抗体免疫反应的方式捕获出来,需要用到一抗;大家很多时候会纠结选多抗还是单抗,下边就简要为大家介绍一下多抗与单抗的差异。
多克隆抗体:
天然的抗原中含有多种特异性的抗原表位,以该抗原刺激免疫系统,体内 多个 B细胞克隆被激活,产生针对不同表位的抗体群,即 多克隆抗体 。
优点:
a.制备成本低廉且制备速度较快。
b.制备过程比单克隆抗体简单。
c.高亲和性:由于靶蛋白上的多个表位能够结合不止一个抗体分子,多克隆抗体可放大低表达水平靶蛋白的信号。
d.可识别多个表位,有利于免疫沉淀 (IP) 和染色质免疫沉淀 (ChIP) 等实验获得更好的结果。
e.与单克隆抗体相比,对微小抗原变化具有更强的包容性。
f.可识别与免疫原蛋白质具有高度同源性的蛋白质,还可用于检测非免疫原物种的靶蛋白。
g.检测变性蛋白质的首选。
h.多表位可提升检测的稳定性。
缺点:
a.易产生批次间差异。
b.产生大量非特异性抗体,可能会在某些应用中产生背景信号。
c.由于具有多个表位,检测免疫原序列的交叉反应性非常重要。
d.不适用于探测抗原的特定结构域,因为抗血清通常会识别多个结构域。
单克隆抗体:
单克隆抗体由单个B细胞亲本克隆产生,因此,只能识别单个抗原的特定的一个表位。单克隆抗体对靶向的抗原表位具有高度特异性,非特异性交叉反应性低,批间变异小。
优点:
a.不易产生批次间差异。
b.制得的杂交瘤细胞为持续且可再生产的单克隆抗体来源,而且所有批次均相同,有助于提升实验过程和实验结果的一致性和标准化水平。
c.切片和细胞染色产生的背景信号更少。特异性地检测一个靶表位,不易与其它蛋白质发生交叉反应。
d.与多克隆抗体相比,单克隆抗体的同质性非常高。在相同的实验条件下,单克隆抗体实验之间的结果重现性非常好。
e.得益于其高特异性,单克隆抗体能够在相关分子的混合物中极为高效地结合抗原。
缺点:
a.技术要求较高。应用技术之前需接受专门培训。需要花费较长时间制备杂交瘤细胞。所以价格较高。
b.特异性过高,以致于无法进行跨物种的检测。
c.与多克隆抗体相比,更易受化学处理造成的抗原表位丢失的影响。
d.仅由一种抗体亚型组成。如需使用二抗进行检测,应针对正确的亚类选择抗体。
多克隆抗体:
天然的抗原中含有多种特异性的抗原表位,以该抗原刺激免疫系统,体内 多个 B细胞克隆被激活,产生针对不同表位的抗体群,即 多克隆抗体 。
优点:
a.制备成本低廉且制备速度较快。
b.制备过程比单克隆抗体简单。
c.高亲和性:由于靶蛋白上的多个表位能够结合不止一个抗体分子,多克隆抗体可放大低表达水平靶蛋白的信号。
d.可识别多个表位,有利于免疫沉淀 (IP) 和染色质免疫沉淀 (ChIP) 等实验获得更好的结果。
e.与单克隆抗体相比,对微小抗原变化具有更强的包容性。
f.可识别与免疫原蛋白质具有高度同源性的蛋白质,还可用于检测非免疫原物种的靶蛋白。
g.检测变性蛋白质的首选。
h.多表位可提升检测的稳定性。
缺点:
a.易产生批次间差异。
b.产生大量非特异性抗体,可能会在某些应用中产生背景信号。
c.由于具有多个表位,检测免疫原序列的交叉反应性非常重要。
d.不适用于探测抗原的特定结构域,因为抗血清通常会识别多个结构域。
单克隆抗体:
单克隆抗体由单个B细胞亲本克隆产生,因此,只能识别单个抗原的特定的一个表位。单克隆抗体对靶向的抗原表位具有高度特异性,非特异性交叉反应性低,批间变异小。
优点:
a.不易产生批次间差异。
b.制得的杂交瘤细胞为持续且可再生产的单克隆抗体来源,而且所有批次均相同,有助于提升实验过程和实验结果的一致性和标准化水平。
c.切片和细胞染色产生的背景信号更少。特异性地检测一个靶表位,不易与其它蛋白质发生交叉反应。
d.与多克隆抗体相比,单克隆抗体的同质性非常高。在相同的实验条件下,单克隆抗体实验之间的结果重现性非常好。
e.得益于其高特异性,单克隆抗体能够在相关分子的混合物中极为高效地结合抗原。
缺点:
a.技术要求较高。应用技术之前需接受专门培训。需要花费较长时间制备杂交瘤细胞。所以价格较高。
b.特异性过高,以致于无法进行跨物种的检测。
c.与多克隆抗体相比,更易受化学处理造成的抗原表位丢失的影响。
d.仅由一种抗体亚型组成。如需使用二抗进行检测,应针对正确的亚类选择抗体。
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Sigma-Aldrich
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