酶的特异性鉴定试验
【实验目的】
1、了解酶的特异性
2、掌握检查酶特异性的方法及原理
【实验原理】
酶是生物体内一类具有催化功能的蛋白质（传统酶的概念），即生物催化剂。它与一般催化剂的最主要区别就是具有高度的特异性（专一性）。
所谓特异性是指酶对所作用的底物有严格的选择性，即一种酶只能对一种化合物或一类化合物（其结构中具有相同的化学键）起一定的催化作用，而不能对别的物质起催化作用。酶的特异性是酶的特征之一，但各种酶所表现的特异性在程度上有很大差别，又可分为结构特异性和立体异构特异性。
淀粉和蔗糖都是非还原性糖，分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物。唾液淀粉酶可水解淀粉生成具有还原性的麦芽糖，但不能水解蔗糖；蔗糖酶可水解蔗糖生成具有还原性的葡萄糖和果糖，但不能水解淀粉。
Benedict试剂是含硫酸铜和柠檬酸钠的碳酸钠溶液，可以将还原糖氧化成相应的化合物，同时Cu2+被还原成Cu+，即蓝色硫酸铜溶液被还原产生砖红色的氧化亚铜沉淀。因此，可用Benedict试剂检查两种酶水解各自的底物所生成产物的还原性，来加深对酶特异性的理解。
【器材及试剂】
1、仪器：
（1）研钵；
（2）试管：6支；
（3）试管架；
（4）小烧杯；
（5）刻度吸管：1毫升×5，2毫升×1；
（6）漏斗；
（7）电热恒温水浴。
2、试剂：
（1）1%淀粉溶液（含0.3%NaCl）：将1克可溶性淀粉及0.3克氯化钠，混悬于5毫升蒸馏水中，搅动后缓慢倒入沸腾的60毫升蒸馏水中，搅动煮沸1分钟。晾至室温后加水至100毫升，放置于冰箱贮存。
（2）2%蔗糖溶液：蔗糖是典型的非还原糖，若商品蔗糖中还原糖含量超过一定标准，则呈还原性，这种蔗糖不能使用。所以，实验前必须进行检查。本实验用的蔗糖至少应是分析纯的试剂，要现用现配。
（3）淀粉酶液：稀释200倍的新鲜唾液。
（4）蔗糖酶液：取1克新鲜酵母放入研钵中，加少量石英砂和蒸馏水，研磨10分钟左右，用蒸馏水稀释至50毫升，静止片刻再过滤，滤液即为蔗糖酶提取液。
（5）本乃狄（Benedict）试剂：将17.3克硫酸铜溶解于100毫升蒸馏水中。冷却后稀释至150毫升。取柠檬酸钠173克及碳酸钠（Na2CO3·H2O）100克，加水600毫升，加热使之溶解，冷却后，稀释至850毫升。最后把硫酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如有沉淀可停止。
【操作步骤】
取6支试管编号，按下表操作：
扩展资料：
酶（enzyme）是由活细胞产生的、对其底物具有高度特异性和高度催化效能的蛋白质或RNA。
酶的催化作用有赖于酶分子的一级结构及空间结构的完整。若酶分子变性或亚基解聚均可导致酶活性丧失。酶属生物大分子，分子质量至少在1万以上，大的可达百万。酶是一类极为重要的生物催化剂（biocatalyst）。
由于酶的作用，生物体内的化学反应在极为温和的条件下也能高效和特异地进行。随着人们对酶分子的结构与功能、酶促反应动力学等研究的深入和发展，逐步形成酶学（enzymology）这一学科。
酶的化学本质是蛋白质（protein）或RNA（RibonucleicAcid），因此它也具有一级、二级、三级，乃至四级结构。
按其分子组成的不同，可分为单纯酶和结合酶。仅含有蛋白质的称为单纯酶；结合酶则由酶蛋白和辅助因子组成。例如，大多数水解酶单纯由蛋白质组成；黄素单核苷酸酶则由酶蛋白和辅助因子组成。结合酶中的酶蛋白为蛋白质部分，辅助因子为非蛋白质部分，只有两者结合成全酶才具有催化活性。
酶的反应特点：
1、高效性：酶的催化效率比无机催化剂更高，使得反应速率更快；
2、专一性：一种酶只能催化一种或一类底物，如蛋白酶只能催化蛋白质水解成多肽；
3、多样性：酶的种类很多，迄今为止已发现约4000多种酶，在生物体中的酶远远大于这个数量；
4、温和性：是指酶所催化的化学反应一般是在较温和的条件下进行的；
5、活性可调节性：包括抑制剂和激活剂调节、反馈抑制调节、共价修饰调节和变构调节等；
6、易变性：大多数酶是蛋白质，因而会被高温、强酸、强碱等破坏；
7、有些酶的催化性与辅助因子有关；
8、改变化学反应速率，本身几乎不被消耗；
9、只催化已存在的化学反应；
10、能加快化学反应的速度，但酶不能改变化学反应的平衡点，也就是说酶在促进正向反应的同时也以相同的比例促进逆向的反应，所以酶的作用是缩短了到达平衡所需的时间，但平衡常数不变；
11、降低活化能，使化学反应速率加快；
12、与无机催化剂一样，也会出现中毒现象。
参考资料：
上海敏心
2023-08-27 广告
