Question

pcr扩增中,如何设计引物?

Answer 1

1、引物5撇端可以修饰。引物3撇端不可修饰。引物3撇端要避开密码子的第3位。
2、引物设计需要注意的地方很多，在大多数情况下，我们都是在知道已知模板序列时进行PCR扩增的。设计的目的是在两个目标间取得平衡：扩增特异雹枯性和扩增效率。
3、源橘洞PCR引物设计的11条黄金法则引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。
4、可以使用oligo6或者primer5等软件设计。用这些软件选择引物，主要就是看引物的稳定性，形成二聚体的可能性，退火温度等等参数。如果你的序列同源性不高，GC含量也还可以的话，可以使用一些经验性原则。
5、PCR的技术的主要步骤及PCR引物设计伍盯的一般原则分述如下：PCR的技术的主要步骤：DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。