Question

pcr 产物测序后双峰，我该怎么办

Answer 1

所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。其原理是在实时荧光定量 PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行， PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。 更专业的解答可联系广州双螺旋基因技术有限公司，产品服务：广州双螺旋基因技术有限公司专注于检测设备及配套试剂的研发、生产及销售，致力于为客户提供分子检测整体服务体系，目前已推出检测仪器与检测试剂等多种产品，涵盖水产养殖病害检测、致病微生物检测、物种鉴定等多个应用领域。谢谢！

Answer 2

　　可能有三种原因：
　　一，pcr产物不纯，电泳条带单一并不一定就说明没有非特异性扩增，也可能非特异性扩增产物与目标产物size相近，或浓度很低。
　　解决办法是提高退火温度做pcr,或直接换pcr引物，再或者可以补订专门的测序引物做测序反应，提高测序反应特异性。
　　二，pcr产物纯化做的有问题。
　　可补做纯化看看。
　　三，测序引物有污染。
　　可补送引物测序。如果做的是克隆测序，还有可能是纯在双克隆。