Question

原代乳小鼠心肌细胞培养求助

Answer 1

（转载，仅供参考）(1)取BATcell的Isolationbuffer按1：1000向其中加入p/s，4°C保存。Notice:用前按1~2mg/ml比例向Isolationbuffer中加入collagenase(c5138)，用滤器过滤消化液，并置于37°Cwaterbath预热。(2)Steps:先热上medium(培养用,分离用,消化用)1）将新生Mice泡入70%EtoH中约5mins进行消毒；(出生后两天内)2）剪开其肩部中间的外皮，两个镊子拨开皮肤,弯头镊子夹取其BAT（位于肩胛骨间的蝴蝶状组织，尽量勿取到其他多余组织）移入含PBS的60-mmdishes中；3）用PBS洗2~3遍；4）将BAT组织挑出来,在不含液体的情况下剪碎为1mm2的小块细碎的组织装进3ml含collagenase的Isolationbuffer中；37°Cwaterbath中消化30mins5）30min后将消化液用力甩，以使附着的cell散落；液体越浑浊说明震荡下来的细胞越多。6）用筛网将消化液过滤至15ml离心管中，离心：200g，5min，弃上清；7）用Isolationbuffer（不含collagenase）吹起离心管底沉淀，混匀，离心：200g，5min，弃上清；8）用5ml20%FBS-DMEMmedium重悬cell，接于60-mmdishes中，培养，次日先用培养液清洗下再换液；取过很多次了，只要小鼠是出生2天内的就不会有问题的~！