Question

发生禽流感后如何采集分离病原及运送病料样品？

Answer 1

诊断很大程度上依赖于样品的质量、样品在进行实验室处理前的储存和运输过程的情况。用于细胞培养、鸡胚接种、直接检测病毒抗原或核酸的呼吸道病毒的样品，应在流感症状出现的开始3天进行采集。禽流感主要由呼吸道和消化道感染。因此，哺乳动物及禽类上呼吸道采集的样品适合用于流感病毒的鉴定和诊断。上呼吸道拭子分为鼻棉拭子、喉棉拭子和气管棉拭子三种。已屠宰或已死亡的哺乳动物应在下呼吸道采集样品，样品分为气管棉拭子、支气管棉拭子、肺组织等三种。禽类样品采集的部位应集中在呼吸道和大部分的消化道，采集的病毒样品种类包括泄殖腔棉拭子和粪便，其中泄殖腔棉拭子可从活体鸡或剖杀的鸡群中采集，从鸡舍或环境中采集粪便样品是常用的采样方法，但其具有不能准确确定样品来源的缺点，如果怀疑死禽体内含有高致病力的禽流感病毒，还应采集有代表性的内脏器官如脑、脾脏、心脏、肺脏、胰腺、肝脏和肾脏以及呼吸道、消化道等部位的样品。

如果想通过对感染细胞进行免疫荧光染色的方法直接检测病毒，那么采集的病料应放在冰浴中，在1～2小时内进行样品处理。用于分离病毒的样品，采完样后应立即将病料放在冰箱中冰冻，并尽可能早地接种于敏感细胞或鸡胚。如果样品不能在48～72小时内处理，应冷冻在-70℃或以下。如果装样品的试管没有被密封，或者装样品的塑料袋封闭不严，则样品不能放在干冰中运输或储存。因为干冰接触到病料样品后，能很快地灭活其中可能存在的流感病毒。

采集的样品应放在适宜的运输缓冲液中才能确保病毒的分离。目前已有一些适用于不同病毒样品的运输缓冲液，例如Hanks平衡盐溶液、细胞培养液、磷酸盐缓冲液、胰蛋白胨—磷酸肉汤、犊牛肉汤和蔗糖磷酸缓冲液等，在这些运输缓冲液中应添加0.5%～1%的蛋白质，例如牛血清白蛋白、明胶，还应添加抗生素以防止细菌的生长。