什么叫引物?引物分为正向引物和反向引物?

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生活小学问686
高粉答主

2023-04-27 · 生活其实很简单,把自己照顾好,重要待好
生活小学问686
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正向引物,反向引物。

引物自身及引物之间不应存在互补序列。连续互补的碱基应该要少于4 个。引物应使其G值不要太高,G值越大,则双链越稳定。

引物长度和GC 含量要适中。引物长度大概为18~28 bp,但不应大于38 bp,引物过短会影响到扩增的特异性,太长的话其延伸温度将会大于74 ℃,不利Taq 酶的催化反应。若扩增产物为4~5 kb,引物最好不要少于24bp。

扩展资料:

注意事项:

1、引物的长度一般为15-30 bp,常用的是18-27 (22)bp,但不应大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA聚合酶进行反应。 

2、碱基要随机分布:引物序列在模板内应当没有相似性较高,尤其是3’端相似性较高的序列,否则容易导致错误引发(False priming)。降低引物与模板相似性的一种方法是,引物中四种碱基的分布最好是随机的,不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。

3、3′端不应超过3个连续的G或C,如GGG或CCC,因这样会使引物在GC富集序列区错误引发。

4、引物3’端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率,末位碱基为A的错配效率明显高于其他3个碱基,因此应当避免在引物的3’端使用碱基A。

参考资料来源:百度百科-引物设计

参考资料来源:百度百科-正向引物

参考资料来源:百度百科-反向引物

研载生物科技(上海)有限公司_
2023-04-12 广告
研载生物可以提供环状RNA成环验证实验服务,欢迎咨询!1.琼脂糖凝胶电泳实验分别用Divergent primer 和Convergent Primer 检测cDNA样品和gDNA样品。对照组为GAPDH,分别使用Diveraent Pri... 点击进入详情页
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洛心书
2023-04-30 · TA获得超过154个赞
知道小有建树答主
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引物(Primer)是在分子生物学实验中常用的短片段单链DNA或RNA,通常由15-30个核苷酸组成。引物在实验过程中起到特异性结合目标DNA或RNA模板的作用,并为DNA或RNA聚合酶提供起始位点,从而引导聚合酶进行核酸的合成。
在聚合酶链反应(PCR)等实验中,引物通常分为正向引物(Forward Primer)和反向引物(Reverse Primer)。正向引物和反向引物的主要区别在于它们结合目标DNA模板的方向。
正向引物与目标DNA模板的正链(也称为感应链,5' - 3'方向)互补结合,从而引导DNA聚合酶在3' - 5'方向进行新链的合成。反向引物与目标DNA模板的负链(也称为反式链,3' - 5'方向)互补结合,引导DNA聚合酶在5' - 3'方向进行新链的合成。
通过使用正向引物和反向引物,PCR实验可以在双链DNA模板的两条链上特异性地扩增目标片段。这种方法在基因克隆、基因表达分析、基因编辑等领域具有广泛的应用。
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