质粒DNA提取和细胞基因组DNA提取的异同
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质粒DNA提取一般用沸水浴法和碱裂解法,现在一般都采用碱裂解法,并有试剂盒可用,它主要是将细胞内的环状质粒提取出来,一般需要用SDS裂解,RNA酶降解,然后过柱,再进行洗脱。过程比较简单。
而基因组DNA提取则较为复杂,也需要用SDS裂解和RND酶降解,但降解时间较长,同时对有些革兰氏阳性细菌还要进行溶菌酶处理,最后用氯仿-苯酚进行除蛋白,这一步重复进行多次,在用氯仿除去多余的苯酚,用乙醇清洗烘干后溶于TE缓冲液中,整个过程比提质粒更复杂,耗时也更多。
而基因组DNA提取则较为复杂,也需要用SDS裂解和RND酶降解,但降解时间较长,同时对有些革兰氏阳性细菌还要进行溶菌酶处理,最后用氯仿-苯酚进行除蛋白,这一步重复进行多次,在用氯仿除去多余的苯酚,用乙醇清洗烘干后溶于TE缓冲液中,整个过程比提质粒更复杂,耗时也更多。
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