Question

一代测序，二代测序，三代测序的优点缺点分别是什么，求大神赐教

Answer 1

一代测序，二代测序，三代测序的优点缺点分别介绍如下：

一代测序优点是读长较长、准确性高。缺点是测序成本高、通量低，使得de novo测序、转录组测序等应用难以普及。
二代测序优点是相比一代测序大幅降低了成本，保持了较高准确性，并且大幅降低了测序时间，将一个人类基因组从3年降为1周以内。缺点是序列读长方面比第一代测序技术要短很多。
三代测序优点是读长较长，可以减少拼接成本，节省内存和计算时间。缺点是单读长的错误率偏高，需重复测序以纠错（增加测序成本）。

想要了解更多有关一代测序，二代测序，三代测序的相关信息，推荐咨询海普洛斯。旗下医学检验实验室具有国际顶尖基因测序平台以及完善的国际标准质量体系，通过CAP(美国病理学家协会)/EMQN(欧洲分子基因诊断质量联盟)/中国卫生部临检中心等权威认证，业务覆盖肿瘤全病程管理、遗传性疾病筛查、重大感染性疾病（含新冠核酸）等领域，已为全国500多家三甲医院、数百家科研院所、体检机构、保险公司、互联网平台以及各地政府提供基因检测技术服务和整体解决方案。


【● 没病有必要做基因检测吗？过来人有话说......】

Answer 2

一代测序
优点：
1. 测序长度长，最长可达1000 bp；
2. 价格便宜，周期快，适合低通量样本的研究；
3. 仪器成本相对较低；
4. 对800 bp以内DNA序列上的碱基变异可以精准检测。
缺点：
1. 测序通量低，一个反应只能得到一条序列；
2. 单个反应成本低，获得大量序列的话成本高；
3. 难以检出高GC和重复序列区域；
4.不能检出大片段缺失和拷贝数变异等基因突变类型。

常规二代测序
优点：
1. 通量高，一次可对几十万到几百万条核酸分子进行序列测定；
2. 单条序列成本低
缺点：
1. 序列读长短
2. 建库过程中有PCR过程，会引入错配碱基；
3. 要想得到准确和长度较长的拼接结果，需要较高的测序覆盖率，会增加成本和错误率。

Fast NGS
Fast NGS是针对测序数据量较小的应用场景开发的快速二代测序技术，可应用于线粒体、叶绿体、病毒、质粒等小基因组测序，还包括SNP检测、甲基化检测、16S/ITS测序、PCR捕获测序等基因扩增子的测序.
优点：
1. 更低量，建库要求低至1ng/ul；
2. 更方便，样本要求低，无需自建库；
3. 更经济，低至15元/kb，免费分析SNP/Indel。

三代测序
优点：
读长长，无需PCR扩增，避免了碱基偏好性，DNA方面可简化基因组组装，提高基因组组装指标；RNA方面可得到全长转录本，进行异构体、可变剪切等分析。
缺点：
单碱基准确率低。

Answer 3

第一代指双脱氧末端终止法，扩增后通过毛细管电泳读取序列，每次获取数据量少
第二代为高通量测序，采用微珠或高密度芯片边合成边测序，代表有454，solexa，solid，高通量，可一次获得数G数据，相对与第三代，都仍然需要扩增的方法放大信号，扩增后再检测。
第三代特点是单分子测序，多基于纳米科技，无需扩增，对单分链DNA/RNA直接用合成、降解、通过纳米孔等方式直接测序，核心特点是无需扩增所以成本更低