Question

关于内参基因

Answer 1

内参即是“内部参照”，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。

理想的内参基因应该满足以下条件 ：①不存在假基因（pseudogene），以避免基因组DNA的扩增；②高度或中度表达，排除太高或低表达；③稳定表达于不同类型的细胞和组织（如正常细胞和癌细胞），而且其表达量是近似的，无显著性差别；④表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关；⑤其稳定的表达水平与目标基因相似；⑥不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响。排除内参基因的条件则为：①在正常和异常的细胞/组织中的表达存在差异；②呈现细胞周期依赖的表达；③定位于X染色体。

通常一次提取的DNA/cDNA材料（同管材料）在使用时，无论测定多少基因，都只需设置1次内参3次重复即可。内参消除的主要是提制、反应所导致的材料初始浓度随机性的偏大偏小。对于移液枪加液误差，我们认为是微小的，同时可通过设置重复来削弱此类的影响。

主要参考文献：
[1] 陈凤花,王琳,胡丽华.实时荧光定量RT-PCR内参基因的选择[J].临床检验杂志,2005(05):393-395.DOI:10.13602/j.cnki.jcls.2005.05.047.