转基因的植株要怎样检测?

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2019-06-15 · 农业农村部直属的大型综合出版社
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在植物遗传转化中,外源基因导入植物细胞的频率是相当低的。在数量庞大的受体细胞群体中,通常只有为数不多的一小部分细胞获得了外源DNA,而目的整合到基因组并实现表达的转化细胞则更少。

因此,必须采用一定的检测方法,才能筛选和鉴定出含有目的基因的重组体。目前已发展出一系列的转基因植物的筛选和鉴定方法。在这些鉴定和筛选方法,根据检测的基因功能来划分,可分为调控基因(包括启动子终止子等)检测、选择标记基因检测和目的基因直接检测。

根据检测的不同阶段区分,有整合水平检测和表达水平的检测,基因整合检测方法主要有Southern杂交、PCR、PCR-Southern杂交、原位杂交和DNA分子标记技术法,表达水平的检测包括转录水平检测和翻译水平检测,转录水平的检测法有Northern杂交和反转录PCR(reverse:transcribed:PCR,RT-PCR)检测,翻译水平的检测有酶联免疫吸附法(enzyme:linked:immuno:sorbent:assay,ELISA)和Western杂交等,其中最简便和使用广泛的表达水平的检测是报告基因检测法。由于这些方法的具体操作已在其他章节(课程)介绍过,这里只侧重介绍基于选择标记基因和报告基因的筛选和鉴定方法。

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