Question

简述定量PCR的原理和过程

Answer 1

半定量反转录－聚合酶链反应（semi-quantitative
reverse
transcription
and
polymerase
chain
reaction
,sqrt-pcr）是近年来常用的一种简捷、特异的定量rna测定方法，通过mrna反转录成cdna，再进行pcr扩增，并测定pcr产物的数量，可以推测样品中特异mrna的相对数量。以半定量rt-pcr为基础建立起来的mrna含量测定技术，较含内标化的rt-pcr定量测定的mrna的方法更为简便可行。
这种方法不另设‘内标准',排除了俩对不同引物之间的相互抑制和灵敏读差异，而且具有明显的剂量－效益关系和良好的重复性。
步骤：
1.抽提rna，2.反转录获得cdna，3.以cdna为模板做pcr
注意：
步骤1，rna抽提质量一定要好，注意污染。内参的选择，常用的有βactin和gapdh俩中。步骤3，半定量rt-pcr应该再两管中进行，既内参和目的基因各一管，这样便于控制，做图的时候可以放在一各泳道里跑！指数期和平台期一定要摸清楚！

Answer 2

过程其实和普通pcr一样，只是定量一般会加荧光染料（或荧光探针），整个过程是被仪器监控的所以能够实时的知道扩增的进度。最后根据标准曲线来定量的。

Answer 3

原理1;在含有插入性染料或特异性探针的体系中扩增目标序列.
2
光学系统激发并检测报告荧光
3
报告荧光的强度与所扩增DNA的量呈比例关系
过程和普通PCR差不多，不过引物设计比较复杂，使用的仪器也不一样，在对数期检测。