Question

转基因生物可用于生产人类所需要的药用蛋白，如激素、抗体、疫苗、酶等．如图1是通过生物工程培育能产生

转基因生物可用于生产人类所需要的药用蛋白，如激素、抗体、疫苗、酶等．如图1是通过生物工程培育能产生人胰岛素烟草的过程．请据图回答：（1）基因工程的核心步骤是______（填字母），此过程所需的工具酶是______．（2）如图2是运载体和反转录得到的胰岛素基因的片段，已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-．GeneⅠ和GeneⅡ为质粒上的标记基因，根据图分析，应用限制酶______切割质粒，用限制酶______切割目的基因．构建的重组质粒中，除含有外源基因、标记基因外，还必须含有______和______．（3）B过程中，常用______处理使细菌成为感受态细胞，从而利于重组质粒的导入．（4）如果从分子水平检测人胰岛素基因是否表达成功，可以采用______方法．

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Answer 1

（1）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，即A过程，该过程首先需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA分子．
（2）用限制酶Ⅱ切割质粒时会将两个标记基因都破坏，因此只能选用限制酶Ⅰ切割质粒，而切割含有目的基因的外源DNA分子时，只需用限制酶Ⅱ即可．构建的重组质粒中，除含有外源基因、标记基因外，还必须含有启动子和终止子．
（3）将目的基因导入微生物细胞时，常用感受态细胞法，即常用Ca²⁺处理使细菌成为感受态细胞，从而利于重组质粒的导入．
（4）从分子水平上检测目的基因是否表达成功，可以采用抗原-抗体杂交方法．
故答案为：
（1）A　限制酶和DNA连接酶
（2）ⅠⅡ启动子　终止子
（3）Ca²⁺
（4）抗原-抗体杂交