Question

Western blot 的目的条带较为弥散是怎么回事

Answer 1

目的蛋白质条带模糊

1. 电泳凝胶浓度选择不当。
2. 低于10Kd的小分子蛋白质要用Tricine胶。
3. 靠近前沿的电泳带分辨率不佳。根据分子量与凝胶孔径的关系，选择适当浓度的凝胶。

4. 蛋白质样品水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶，不要反复冻融。

5. 电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。

6. 缓冲溶液、SDS都要新鲜配制。

7. 避免加样过多，提高分辨率。小体积样品可给出窄带，加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15uL。