基因诊断的基本原理是DNA分子杂交为什么

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2017-04-15
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基因诊断的基本原理是DNA分子杂交为什么
DNA分子杂交技术又称DNA探针技术,是利用DNA分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性,对某一特异性DNA序列进行探查的新技术。
DNA分子杂交技术的原理 :
DNA分子杂交的原理是,具有互补碱基序列的DNA分子,可以通过碱基对之间形成氢键等,形成稳定的双链区。在进行DNA分子杂交前,先要将两种生物的DNA分子从细胞中提取出来,再通过加热或提高pH的方法,将双链DNA分子分离成为单链,这个过程称为变性。然后,将两种生物的DNA单链放在一起杂交,其中一种生物的DNA单链事先用同位素进行标记。如果两种生物DNA分子之间存在互补的部分,就能形成双链区。由于同位素被检出的灵敏度高,即使两种生物DNA分子之间形成百万分之一的双链区,也能够被检出。
3、DNA分子杂交技术的工具 ------ DNA探针
DNA探针是利用放射性同位素(如32P)、荧光分子等标记的特定DNA片断,该片断可大至寄生虫基因组DNA,小至20个碱基。DNA探针具有特异性;由于用放射性同位素(如32P)或生物素标记探针,使杂交试验同时具有高度的敏感性。 4、DNA分子杂交技术的应用 :
(1) 不同种生物之间亲缘关系的判断
不同种生物之间亲缘关系的判断,常采用比较不同生物DNA分子差异来进行,常用DNA分子杂交法。将两种生物的DNA分子单链放在一起,如果这两个单链具有互补的碱基序列,就会形成杂合双链区。互补的碱基序列越多,形成的杂合双链区就越多,说明两种生物间的亲缘关系就越近(如图)。或者是把两个物种的DNA单链融合在一起,然后对这条新的DNA加热。两个物种DNA序列的相似程度越高,让这条DNA双链解开的温度也就越高。用这种方法,科学家推测出黑猩猩和人的DNA相似程度是大约98.5%,黑猩猩是与人类亲缘关系最近的动物。
(2) 基因诊断
基因诊断是上世纪70年代末迅速发展一项诊断技术,不仅及时推广应用于临床,并且也很快的被公安部门采用来侦破刑事案件。基因诊断是利用DNA分子杂交等分子学技术直接探查人体基因组DNA存在的缺损或基因表达产物的异常以及患病毒、细菌、寄生虫、真菌等感梁性疾病时,病原体的基因组织或其基因的表达产物作出迅速正确诊断;并取量相微。病毒,细菌等原体得入人体内后需要潜伏一定时间才能出现显示症状,因此采用通常形态学、生化学或血清方法诊断很难及时诊断出来,往往延迟了有效的治疗时间;只有基因诊断技术才能做到病原体尚没有出现症状前,就能作出准确的诊断。基因诊断是用放射性同位素(如32P)、荧光分子等标记的DNA分子做探针,利用DNA分子杂交原理,鉴定被检测标本上的遗传信息,达到检测疾病的目的。例如,利用DNA 探针可以迅速地检出肝炎患者的病毒,为肝炎的诊断提供了一种快速简便的方法。目前用基因诊断方法已经能够检测出肠道病毒、单纯疱疹病毒等许多种病毒。目前核酸分子杂交不但用来检测急性病人标本中的病毒DNA,也用于检测不易分离培养的慢性感染、潜伏感染、整合感染病人标本中的病毒DNA。
(3)环境监测。
据报道,用DNA探针可以检测饮用水中病毒的含量。具体的方法是使用一个特定的DNA片段制成探针,与被检测的病毒DNA杂交,从而把病毒检测出来。此方法的特点是快速、灵敏。用传统方法进行检测,一次需要耗费几天或几个星期的时间,精确度也不高。用DNA探针只需要花费一天的时间,并且能够大幅度地提高检测精度。
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