Question

siRNA转染效率不理想的原因（1）

Answer 1

1. RNA与转染试剂比例不佳

由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。

2. 细胞密度不佳

调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细胞数量较少时转染效率高。由于siRNA沉默时效性的影响，转染后48小时才能进行进行qRT-PCR检测，转染后48-72小时才能进行蛋白检测。如果转染时铺板密度较高，细胞一方面转染效果不理想，直接影响沉默效果和数据可靠性，另一方面，48小时甚至更长时间后，沉默检测最佳点时，过于密集的细胞将影响细胞状态，从而影响实验结果。

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Answer 2

siRNA转染效率不理想的原因有：
1、siRNA纯度太低，注意溶解时，避免RNA酶污染。使用经DEPC处理过的耗材和试剂；
2、siRNA转染试剂复合物浓度低，需优化转染效率，使用合适的转染试剂剂量；
3、血清影响转染效率，配制混合物时，不能含有血清。培养时可以有血清，但是不要有抗生素；
4、脂质体转染试剂保存不当，试剂失效，应置于4℃保存。