Question

核酸凝胶电泳实验需要注意什么

Answer 1

大多情况下，加样时不必更换枪头，可在阴极槽中反复吸打电泳缓冲液清洗，但对Southern 印迹转移和需回收DNA时，应每个样品使用新的枪头，以避免样品交叉污染。 2、上样缓冲液不仅提高样品的密度，使样品均匀沉到样孔底，还使样品带色，便于上样，估计电泳时间和判断电泳位置。 3、EB是一种强烈诱变剂并有中度毒性，应戴手套操作，对于含有EB的溶液也不应直接倒下水道，用后妥善净化处理：EB含量大于0.5μg/ml溶 液先用水将EB浓度稀释至0.5μg/ml以下，每100ml溶液加入100mg活性碳，不时轻轻摇荡混匀，室温放置1小时，滤纸过滤将活性碳与滤纸密封在塑料袋中作为有害废物丢弃。或用专用一次性染料清除袋（Gene有限公司）吸附过夜，再焚烧袋子即 可。 4、应在暗箱窗口观察结果，避免紫外线操作者的损伤。 5、电泳过程中，EB向阴极移动（与DNA相反），延长电泳时间，EB会从凝胶中迁移出来，从而使小片段DNA难于检测，可将凝胶浸在 0.5μg/ml EB溶液中重新染色后检测。 6、加样孔的加样量依DNA样品中片段的数量及大小而定，通常对0.5cm宽的加样孔，DNA上样量在0.1~0.5μg即可有良好的观察效果。如 样品为酶切产物（由大小不同的DNA片段组成），每孔加20~30μg DNA也不致明显影响分辨率。 7、小的凝胶——微型凝胶和中型凝胶的电泳一般比大的凝胶要快，常常用于快速分析。当选择微型或中型凝胶装置时要考虑凝胶槽盛装缓冲液的体积，小胶 通常要在高压下电泳（>10V/cm），所以选择一个相对较大的缓冲液槽比较有利。 ……………… ……………………