基因组高通量测序的原理
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测序方案建立在双脱氧测序法(Sanger等,1977)的基础上。为了从每一克隆插入片段两端成对地进行测序,每一个质粒模板DNA板应配备两个384孔循环测序反应板。
测序反应采用BigDyeTerminatorchemistryversion3.1(AppliedBiosystems)和标准M13或常用正向引物和反向引物。测序反应通过BiomekFX(Beckman)移液操作工作站建立。
机械臂负责等分模板试样,起与反应液混合的作用,反应液含有双脱氧核苷酸、荧光标记的核苷酸、TaqDNA聚合酶、序列引物和缓冲液。
模板和反应板有条形码,且在BiomekFX移液操作工作站上有条形码读取器跟踪,确保模板和反应液转移中没有错误。30~40线性扩增步骤连续循环在MJResearchTetrads或9700热循环仪(Ap—pliedBiosystems)中进行。
扩展资料:
技术发展:
高通量测序平台(high-throughput_genome_sequence_database)自从2005年454LifeSciences公司(2007年该公司被Roche正式收购)推出了454FLX焦磷酸测序平台(454FLXpyrosequencingplatform)以来。
曾推出过3730xlDNA测序仪(3730xlDNAAnalyzer)的AppliedBioSystem(ABI)这家一直占据着测序市场最大份额的公司的领先地位就开始动摇了。
因为他们的拳头产品毛细管阵列电泳测序仪系列(seriescapillaryarrayelectrophoresissequencingmachines)遇到了两个强有力的竞争对手,一个就是罗氏公司(Roche)的454测序仪(RochGSFLXsequencer)。
另一个就是2006年美国Illumina公司推出的Solexa基因组分析平台(GenomeAnalyzerplatform),为此,2007年ABI公司推出了自主研发的SOLiD测序仪(ABISOLiDsequencer)。这三个测序平台即为目前高通量测序平台的代表。
参考资料来源: