Question

【基本染色方法】常用的染色方法

Answer 1

基本染色方法

更新时间：2005-12-20 浏览次数：37

一、革兰染色

本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰阳性（紫色）和革兰阴性（红色）两类。

原理：

1、 等电点学说。

2、 化学学说。

3、 通透性学说。

试剂

1、结晶紫溶液

A液： 结晶紫 2g

95%乙醇 20ml

B液： 草酸铵 0.8g

蒸馏水 80ml

需在用前24 h将A液，B液混合，过滤后装入试剂瓶内备用。

2、碘液

碘 1g

碘化钾 2g

蒸馏水 300ml

将碘与碘化钾混合并研磨，加入少量水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸馏水至完全溶解。最后补足水量。

也可用少量蒸馏水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。

3、脱色液：95%乙醇

4、复染液

A：贮存液：沙黄 2.5g

95%乙醇 100ml

B：应用液：A液 10ml

蒸馏水 90ml

(应用液也可用：石炭酸复红10ml加90ml蒸馏水）

染色方法

1、涂片经火焰固定，加结晶紫液染1min，清水冲去染液。（用滤纸吸去玻片上水分）

2、加碘液染1min，水洗。（吸去水分）

3、加脱色液，不时摇动约10～30秒，至无紫色脱落为止，水洗。（吸去水分）

4、加复染液，染30秒,水洗。（吹干）

5、镜检。

二、抗酸染色

抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。厚涂片时，须掌握染色时间。如果背景过深，影响镜检。（厚涂片的同时，涂薄片一张）。

原理

分枝杆菌细胞壁含脂质较多其中主要成份为分枝菌酸，此物具有抗酸性，染色时与石炭酸复红结合牢固，能抵抗酸性乙醇的脱色作用，因此抗酸菌能保持复红的颜色，达到染色目的。

试剂

1、萋纳石炭酸复红溶液

碱性复红乙醇饱和溶液（碱性复红8克，溶于95%乙醇100亳升）

碱性复红乙醇饱和溶液： 10ml

5%石炭酸溶液： 90ml

2、脱色剂： 浓盐酸 3ml

95%乙醇 97ml

3、复染液（吕弗勒美蓝液）

美蓝乙醇饱和溶液（美蓝0.3g，溶于95%乙醇30ml中）

美蓝乙醇饱和溶液： 30ml

20%氢氧化钾： 0.1ml

蒸馏水： 100ml

染色方法

1、涂片经火焰固定，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，

切不可沸腾。染5 分钟（若染色奴卡菌需要延长时间），水洗（吸去水份）。

2、加脱色剂，不时摇动玻片至无色脱落为止，水洗（吸去水份）。

3、加复染液，染0.5～1分钟，水洗，吹干。

4、镜检。分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。

三、异染颗粒染色

用于白喉棒状杆菌染色，异染颗粒可明显地被显示出来。

试剂

甲液： 甲苯胺蓝 0.15g

孔雀绿 0.2g

冰醋酸 1ml

95%乙醇 2ml

蒸馏水 100ml

将各染料先溶于乙醇，然后加入水与冰醋酸的混合液中，充分混合。静置24小时后过滤备用。

乙液： 碘 2g

碘化钾 3g

蒸馏水 300ml

先将碘化钾加入少许蒸馏水（约2ml），充分振摇，待完全溶解，再加入碘，使完全溶解后，加蒸馏水至300ml。

染色方法

1、涂片经火焰固定，加甲液，染3～5分钟，水洗（吸去水份）。

2、滴加乙液，染1分钟，水洗，吹干。

3、镜检，菌体呈绿色，异染颗粒呈蓝黑色。

四、墨汁染色

用于观察菌体有无荚膜结构，借此鉴定某些细菌，如新型隐球菌

试剂：

印度墨汁、国产优质墨汁或5%黑色素水溶液。

染色方法：

将标本与1 滴染色液在载玻片上混合，加上盖玻片，轻轻压一下使标本混合液变薄（尽量避免产生气泡），在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞。找到后，转换高倍镜确认。