Question

什么是引物设计？

Answer 1

正向引物，反向引物。

引物自身及引物之间不应存在互补序列。连续互补的碱基应该要少于4 个。引物应使其G值不要太高，G值越大，则双链越稳定。

引物长度和GC 含量要适中。引物长度大概为18~28 bp，但不应大于38 bp，引物过短会影响到扩增的特异性，太长的话其延伸温度将会大于74 ℃，不利Taq 酶的催化反应。若扩增产物为4~5 kb，引物最好不要少于24bp。

扩展资料：

注意事项：

1、引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 (22)bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应。 

2、碱基要随机分布：引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错误引发（False priming）。降低引物与模板相似性的一种方法是，引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。

3、3′端不应超过3个连续的G或C，如GGG或CCC，因这样会使引物在GC富集序列区错误引发。

4、引物3’端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率，末位碱基为A的错配效率明显高于其他3个碱基，因此应当避免在引物的3’端使用碱基A。

参考资料来源：百度百科-引物设计

参考资料来源：百度百科-正向引物

参考资料来源：百度百科-反向引物