PCR中的引物是什么
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2024-08-28 广告
2024-08-28 广告
PCR就是聚合酶链式扩增反应,因为DNA是双链,扩增时就需要同时扩增两条链,需要设计上游和下游引物,同时扩增DNA双链因为引物通常是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补; 另一个引物与靶区域另一端的另一条D...
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PCR是一种体外酶促合成特定DNA片段的技术,是根据人类的需要对复杂生命过程的一种简单化的模拟。PCR技术的原理是DNA半保留复制.
PCR的成分包括:
待扩增的DNA(模板)
一对寡聚核苷酸引物
耐高温的Taq
DNA聚合酶
4种脱氧核苷酸的混合物
反应缓冲液。
以
一对寡聚核苷酸引物
①引物的长度为15~25个核苷酸;
②引物碱基,G+C含量以45%~55%为宜;
G+C太少扩增效果不佳,如太多则易出现非特异条带。ATCG最好是随机的分布,以避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列:
③Tm值高于55℃;
④引物扩增跨度以300-500bp为宜,特定的Taq酶可以扩增至10kb的长片段;
⑤引物3’端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR的失败;
PCR的成分包括:
待扩增的DNA(模板)
一对寡聚核苷酸引物
耐高温的Taq
DNA聚合酶
4种脱氧核苷酸的混合物
反应缓冲液。
以
一对寡聚核苷酸引物
①引物的长度为15~25个核苷酸;
②引物碱基,G+C含量以45%~55%为宜;
G+C太少扩增效果不佳,如太多则易出现非特异条带。ATCG最好是随机的分布,以避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列:
③Tm值高于55℃;
④引物扩增跨度以300-500bp为宜,特定的Taq酶可以扩增至10kb的长片段;
⑤引物3’端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR的失败;
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准确地说,PCR的引物是“寡聚核苷酸链”,约20个核苷酸。通常成为RNA引物。
先合成的RNA引物最后成为双链的一部分了
先合成的RNA引物最后成为双链的一部分了
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