Question

PCR共分几步?

Answer 1

标准的PCR过程分为三步：
1.DNA变性
　　（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA
2.退火
　　（25℃-65℃）：系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链.
3.延伸
　　（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右,活性最佳）的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补的DNA链.
　　每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量即增加一倍.如图所示：
　　现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度.