Question

植物组织培养一般方法？

Answer 1

植物组织培养可以分为四个阶段：
（1）建立无菌体系，即外植体及培养基的消毒、接种，获得愈伤组织或器官。
（2）进行增殖，不断分化产生新的植株，或直接产生不定芽及胚状体，也可以根据需要反复进行继代培养，以达到大量繁殖的目的。
（3）将植株转移进行生根培养，可以转入生根培养基，也可以直接切取进行扦插生根。
（4）试管苗过渡，即试管苗出瓶后进行一定时间对外界环境的适应过程。

Answer 2

家庭组织培养
植物的组织培养没有最基本的条件和物品是搞不成的，当时合理的利用一些最简单的用具也并非无法办到。
一、最必需的物品
1、.家用高压锅 1个最好大一点的，装的东西多一点。用于培养基、无菌水等的消毒
2、接种箱 （无菌箱）1个 ，需要自己自制，用一些木板和一块玻璃和二尺布料。用于接种和转移。
3、药用天平1架 最好是500g称量的，小一点也可以，主要用来称琼脂、糖等物品。
4、不锈钢锅或铝锅（煮汤、面条的那种）买。用于煮制培养基用的。
5、搅拌和分装培养基用的调羹一个，用于煮制和分装培养基。
6、培养用的瓶子若干，
7、制棉塞用的棉花、纱布和线若干，用于做瓶口的塞子，要注意的是，棉花要使用普通做棉衣的棉花，不要用医院用的脱脂棉，这样容易穿塞污染。
8、牛皮纸、橡皮圈若干，用于包瓶头和扎包头纸用。
9、酒精灯1盏、解剖刀1把，刀片若干、镊子2把、10ml、100ml量筒各一个，2ml移液管1只、药棉若干。

二、怎样解决蒸馏水和基本药品
培养基的用水在一般人的心目总是觉的十分重要的，其实是多余的担心。冷开水、清洁的河水都是给以用的，并不影响培养的效果。市场上出售的纯净水更是一般培养基理想的用水。最常用、最必要、用量最大的只需购买以下几种就行了。
1、MS培养基的大量元素（家庭或所谓袖珍组培室的培养一般采用MS基就可以了。）共5种。也可以买市售的MS培养基
（1）、硝酸铵
（2）、硝酸钾
（3）、 氯化钙
（4）、硝酸镁
（5）、磷酸二氢钾
2、酒精
3、精密试纸（PH 5.4－7.0）
4、漂白粉或漂白精
5、琼脂
6、白糖
7、福尔马林
8、高锰酸钾（可以到医院或药材商店去买）
9、微量元素、铁盐、维生素类以及激素类药品应用量极少。比如一些激素、维生素类的药品及有针剂也有片剂，他们都有比较准确的含量，你可以去按你的需要去配制比例。

爱好者在家庭环境下进行组织培养的探讨与建议植物组织培养技术，尤其是快速繁殖，并非只有专业人员和专业实验室才能够完成的。作为对多肉植物和组织培养有着浓厚兴趣的爱好者，在充分利用家庭条件的基础上，同样可以制备出自己的试管苗来的。在我们进行多肉植物的栽培中认识到，一些比较名贵的园艺品种，比如：万象、玉扇、寿、高纹鹰爪等十二卷属品种，还是缤纷橄榄、何鲁牵牛等块茎类植物，甚至于星球属、岩牡丹属等等，这些植物的常规繁殖系数很低，他们都可以采用组织培养来解决其繁殖问题，并且可以得到相当数量的幼苗。对于奇想天外等种子萌发困难的植物，同样可以借助组织培养来进行无菌播种。在进行组织培养过程中，不但可以对培养的植物有更深一层的认识，对常规的栽培有着相当大的意义。许多搞组织培养的专家，最初都不是专业学组培的，就是凭着兴趣和探索精神取得辉煌成绩的。关键是，爱好者有着浓厚的兴趣，非凡的观察力和细致入微的操作，这些都可以弥补非专业的缺陷，并且可以充分利用日常生活中的各种可利用资源，这些就足以让爱好者在家庭环境下完成组织培养了。同时这也不仅仅满足了自己的兴趣，还可以有一定的经济收益，甚至可以有所创新和发明。
一、如何解决场地和基本设备：
进行组织培养，没有一定的设备是无法开展的。正规实验室的组织培养设备是昂贵的，不适合家庭消费，但如果能有途径买到廉价的实验室设备，那就在好不过了。如果没有办法搞到实验室设备，就不妨动手自己制作一些简单的设备。
1.无菌操作的主要设备——接种箱和压力锅：
接种箱：植物组织培养的主题操作需要在一个相对密闭的无菌环境中进行。那么说我们首先要创造一个密闭的环境，可以利用一些木料、塑料板、有机玻璃、铝合金骨架等等廉价的材料，动手粘合一个小巧的接种箱。具体的参数可以找一本“食用菌栽培”的书籍，模仿种蘑菇的接种箱做一个即可。需要注意的是，组织培养的接种箱的密闭性要求比较高，尽量避免腐朽的木材和易生锈的材料，箱子的顶端按放两盏灯：20w的紫外线灯和20w的日光灯。箱体的周边尽量采用玻璃材料，因为这样便于观察，有时候接种箱还可以借用为培养箱，周边采用玻璃材料更方便于观察和培养。
高压锅：主要用来对培养基和其他材料的灭菌。在实验室通常使用医用高压灭菌器，然而在家庭要充分利用厨房使用的高压锅，高压锅的压力要低于灭菌器，但是适当延长灭菌时间，还是可以取得较好的效果的。比如：对培养基灭菌40分钟就基本上可以达到灭菌效果（灭菌器是20分钟）；无菌水采用间歇灭菌法，先用高压锅压40分钟，放置24小时，再压20分钟即可达到效果。
2.场地：
这个就因人而易了，总体的要求就是进行组织培养操作的地方要尽量无尘，减少空气流动，最好有一定的阳光。比如书房、写字间都可以用来进行无菌操作。
进行培养基的配制可以借用一下厨房，但所使用的器具必须和厨具分开。一般说，组织培养中的几乎全部化学物质对人体是无害的，除了少数激素类物质和灭菌剂。对于有毒害的物质，需要认真保管，以免发生危险。
3.辅助设备：
主要指冰箱，它是用来储存化学物质和培养基的。天平，可以采用感量在100克的托盘天平，甚至用中药的药衡都可以代替。培养架，这个就更简单了，采用铝合金-玻璃的培养箱既可以满足要求，如果日光不足，可配合日光灯补光等。
4.化学试剂：
化学试剂是不可缺少的，因为组织培养的核心就是培养基的成分，而并不是简单的无菌操作。一些用量较大的化学物质是有必要买的，比如大量元素（硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙等）、高锰酸钾、甲醛、酒精、白砂糖、琼脂等等。微量元素和有机复合物不需要购买，因为它们的用量很小，我们可以用蔬菜浸汁或者马铃薯浸汁来代替。激素是必不可少的，他们的称量需要借助分析天平，但这是家庭条件所不允许的，如果有条件可以借助关系单位代替配成母液，每次取一些使用即可。最好的办法是到农资商店（卖农药化肥的地方），它们一般出售农业用的激素，有的是用安瓿装的，按照一定的比例加入到培养基当中即可。近几年来，有些化学品公司开始生产植物组织培养基原粉，只需要称取一定量加水即可，很方便。比如泛生化学品公司生产的ms原粉，只需要称量40克，加1升水，用微波炉加热5分钟即可分装，相当简便。
消毒剂通常采用氯化汞（剧毒），如果不容易搞到，可以用漂白粉代替。
调节酸碱度时，可以采用家庭常用的纯碱和白醋。
5.培养容器和玻璃仪器：
组织培养的容器要求并不高，只要玻璃颜色为透明色即可（钠玻璃不可以）。
我们可以到垃圾站去看看，捡回一些废旧的果酱瓶就可以了。比较好用的是阿香婆辣酱瓶，我们实验室也是采用的这种瓶子。瓶子的封口膜采用聚丙烯塑料即可，如果不好找到，可以采用微波炉专用的锡箔纸甚至方便面的袋子，折叠成双层，用橡皮圈固定即可。
其它玻璃仪器，比如烧杯、玻璃棒都可以用家庭的杯子和筷子代替；一些度量仪器，如量筒和移液管最好到玻璃仪器商店购买，恐怕花不了20元钱就可以配置一套相当棒的组培玻璃仪器。
6.其它：
还有一些用品是必需的。比如精密ph试纸（5.4~7.0），需要买一本，大约花1.5元即可搞定；酒精灯也不需要买，用墨水瓶配上一个玻璃环，再加上一个棉花芯，最后用农夫山泉矿泉水的瓶盖做灯冒，这样的酒精灯很小巧，适合接种箱使用。刀子剪子镊子是必需的，到花市的工具摊位上，花10元钱全部搞定，注意选比较小巧的工具。
关于用水，按理说应该使用蒸馏水，但是我们家庭饮用的纯净水比蒸馏水还要纯，那么说借用一些饮用水就可以了。我们曾经采用康师傅纯净水进行动物细胞的培养，效果都是很不错的，更何况于植物细胞培养了。
以上是组织培养的基本设备和试剂，主要突出了他们相关的替代品，因为作为组织培养中的快速繁殖，它的要求是相当低的。我们的家庭培养和工厂化是不同的，工厂化生产组培苗要追求高增殖率，所以它的要求就比较精细和标准。我们的家庭培养则不需要那么准确，只要达到培养成功的目的即可。当然，如果想提高增殖倍率和试管苗的品质，必须尽量贴近实验室的用具和器材，代用品总是有一定的缺陷的。

（一）必须的设施物品及代用品
1、代用品
家庭用的电冰箱，可用于贮存培养基母液（4℃）及需低温贮存的药品（如生物调节剂）。
高压锅：它可用于培养基、无菌水、玻璃器皿及其他组培用具的消毒灭菌。如所用水硬度大可用凉白开水，进行消毒灭菌。避免被消毒灭菌物品表面结垢。
不锈钢锅或铝锅：它可用于培养基、溶化琼脂（起水浴锅作用）及组培用具消毒灭菌。
刷净的废弃食油桶：它可以用来贮存蒸馏水。
小白瓷碟：可以用于接种及盛放消毒液（若放消毒液，就不要再食用，以免中毒）。
日光灯：它可用于组培过程中光源补充。
洗净废弃的罐头瓶：它可以用于组培培养之用，代替锥形瓶、试管。
组培场地可在自己的房间内进行。在配制培养基和接种时，不要赶在家庭成员较多时进行，如室内已安装了空调，那么在初代培养和继代培养、乃至小苗过渡时均有好处。
2、自制用具
（1）接种箱的制作：组培过程中的超净工作台是很贵重的设备。如果我们用自制的接种箱来代替，就可以大大节省开支，有利于普及。
自制的接种箱的用料，可以是胶合板、纤维板、玻璃（3毫米厚）、木条（装修房屋用的龙骨），甚至可以用使纸板的包装箱（包装箱的质量要稍好一些的，如电视机的包装箱），也可以用有机玻璃。
其接种箱的大小，可以根据各自的家庭条件制作。制作太小不便于操作，但相对来说消毒容易，且占地较少；制作较大的便于操作，但消毒工作显得不易，且占地面积较多。一般来说作成70厘米长、45厘米宽。50厘米高较为合适。
（2）培养箱的制作：培养箱可代替培养室，也可以用于过渡苗使用。它可以用玻璃制作，或利用长方形鱼缸。因此，可用玻璃粘结制作。其大小可按自己家庭居室面积和组培的量来决定。
3、需购置用具
普通天平（500克）：用于称量配制培养基药品，或用称量金银、中药的戥子称，用于称量配制培养基药品、微量元素及生物调节剂；或购买微量元素及生物调节剂时，买已分装的。酒精灯1盏：用于接种时，灼烧消毒灭菌。漏斗（亦可用购买桶装食用油，所配给的漏斗）：用于分装培养基用。长镊子2把：用于接种。解剖刀2把、刀片若干：用于接种。10、50、100毫升量筒各1个：用于配制培养基用。长把牛角勺2把：用于配制培养基取药品。1、2、5毫升移液管各1个：用于配制培养基用。
耐高温塑料膜或牛皮纸：用于包扎培养瓶口及表糊自制接种箱内部棱角处。橡胶圈：用于绑扎培养瓶口。脱脂棉：用于操作人员及组培用具酒精棉球消毒。pH(5～7）试纸1本：用时可剪成小条检测培养基pH值。酒精1瓶：用于酒精灯及消毒。漂白粉1瓶：用于消毒。福尔马林1瓶：用于接种箱消毒（在每次操作前2～10小时，将10～20毫升福尔马林倒入小白瓷碟内，在操作前取出）。MS培养基所需药品；用于配制培养基。盐酸及氢氧化钠：用于调pH值。如若购置1盏紫外灯，进行室内及接种箱消毒更为理想。
（二）操作时注意事项
家庭操作与单位不同，因而要注意以下事项：要注意安全，妥善保管药品。特别对老人和小孩；操作时要消毒仔细严格，接种时操作人员戴好口罩、工作帽，避开电风扇及大风沙天气，家庭成员多时避免操作；消毒前后避免家庭所养宠物进人工作间；药品称量要准确无误；如果家庭不具备温度调控（如调温空调），应避免在盛夏、寒冬进行；红掌组培要一步步来作，可先作容易组培的花卉，待取得经验后再做难作的花卉。

1.培养容器和玻璃仪器的准备：
进行培养基的配制首先要准备好培养瓶和配制使用的玻璃仪器。培养瓶一般使用各种果酱瓶，要先用洗洁精浸泡瓶子4~8小时，再用流水冲洗数次。其他的玻璃仪器同样需要这样清洁，直到玻璃壁上不挂水珠而是成为水膜为止。清洗完毕的玻璃容器要倒扣，空去瓶内的水。
清洗干净的容器要注意防尘，尽量放置在玻璃柜中。更简单的是用干净的毛巾将容器盖住。
移液管要用吸球来清洗，反复用蒸馏水吹吸直到洁净为止，将移液管放置在一个长筒中，便于使用。一般移液管只能使用一次，即要清洗，所以有多必要准备几只移液管，建议：10ml/2支，5ml/2支，1ml/5支。
2.培养基的配制：
经典的组织培养用培养基是ms配方，其基本上划分为：大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、植物激素、糖和支持物。这些成分的用量都在毫克级，用普通天平是难以称量的，为了解决这个问题，我们可以按比例放大各成分的用量配制成母液，使用的时候按一定比例加入即可。
下面将一种ms培养基的母液配制方案公布如下：
大量元素：硝酸铵66.0克；
硝酸钾76.0克；
无水氯化钙13.3克；
七水硫酸镁14.8克；
磷酸二氢钾6.8克。
以上分别溶解后合并定容到1升，每配制1升标准ms培养基取25毫升。
铁盐：七水硫酸亚铁5.56克；
乙二胺四乙酸二钠（edtana）7.46克。
以上两种分别加热溶解，混合，定容到1升，调整ph到5.5以下，每配制一升ms取5毫升。
微量元素和有机复合物的用量过于微小，为了简便我们可以用蔬菜提取液或者马铃薯提取液代替。通常我们习惯用100克菠菜加100ml的水煮沸10分钟，过滤留滤液，每配制1升ms培养基加入20~50毫升提取液。同样也可以使用带皮马铃薯100克加200毫升水煮沸15分钟，过滤留滤液，每升ms加入50~100毫升即可。
加入上述各组分后，每升ms培养基还需要加入白砂糖30克，琼脂7克。
这里要说明的是，糖和琼脂都是可变的量，要根据需要调整。另外制作果冻用的卡拉胶也可以代替琼脂，透明度更好。
上述各成分加入后，定容到800毫升左右，用微波炉加热，直到琼脂全部溶解为止。此时加入所需的植物激素（通常配制成0.1%溶液，这样每取1毫升，换算到培养基中就是1ppm）。然后加水定容到1100毫升（1.1升），之所以多出0.1升是为了抵消分装和消毒中的损耗。最后用酸碱调整ph到5.8~6.0。
3.使用ms原粉配制培养基：
目前国内的一些化学品公司开发了简便的ms培养基原粉，大大简便了培养基的配制，根据不同公司的说明选择培养基的种类。下面就以ms原粉为例： ms培养基原粉，包括了大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖和琼脂，一般按使用方法称量，微波炉加热溶解，加入激素，定容到1100毫升（1.1升），调整ph值到5.8~6.0。
4.分装：
将配制好的培养基分装在培养容器中，注意要趁热分装，因为琼脂在40度以下就会凝固。每个培养瓶装培养基大约是瓶容积的1/6~1/5，注意不要将培养基挂在瓶的外壁，这样容易造成污染。分装后用聚丙烯薄膜或着方便面的袋子封口，用胶圈固定（胶圈尽量选择自行车的内胎，这种胶圈比较耐热）。
5. 灭菌：
采用家庭压力锅消毒，建议到医疗器械用品商店买一些“灭菌效果试纸”，它们可以指示灭菌效果，当灭菌达到效果时会变色。把试纸和培养基同时放入锅内，加热到有大量蒸汽冒出，再加上压力伐，维持小火30~40分钟。
灭菌完毕后自然冷却，将培养基取出，放在阴凉无尘处备用。
6. 接种箱的准备：
新制作的接种箱必须要清洁干净，尽量做到无死角。每次使用前2小时，将操作所需要的全部物品放入接种箱，再用一个小烧杯加入3~5克高锰酸钾放入接种箱内，在箱内向烧杯中倒入2~3毫升的甲醛溶液，大约几秒钟后会看到甲醛蒸汽出现，这样可以对接种箱内的所有物品进行初次消毒；同时打开紫外线灯照射。紫外线灯是高电压穿激汞蒸汽产生的，紫外线进行第二道灭菌，在紫外线照射大约15分钟后，会激发氧气形成臭氧，臭氧作为第三道灭菌防线，这样经过三次灭菌，接种箱基本上可以达到无菌标准。
在操作前15分钟内，向刚才蒸发甲醛用的烧杯中倒入5毫升浓氨水，因为甲醛对人体有毒害作用，氨水可以和甲醛形成一种叫做“六亚甲基四胺”的固体物质，从而中和了甲醛的刺激性蒸汽。这个时候紫外灯不要关掉，要继续照射，直到操作前5分钟关闭，维持黑暗5分钟，然后再打开日光灯进行操作。维持5分钟黑暗的原因是，紫外光对微生物的杀灭是作用于dna的胸腺嘧啶，形成四聚体，但是微生物具有一种光复活蛋白，可以在有可见光的环境下还原胸腺四聚体，而使微生物复活，这个作用叫做“光复活作用”，所以在关掉紫外灯后必须维持黑暗几分钟，避免光复活作用的出现。

怎样在家庭开展组培工作

制备
家庭组培因受到条件的限制，不可能配置大量的配养基，，一般每次配置1升为宜。煮制后用PH试纸测定后，分装成35－40瓶，塞好棉塞，包好包头纸。（棉塞一定要用作棉衣的棉花卷制，不能使用脱脂棉，然后用纱布包紧，用棉线扎好。棉塞的松紧以手提棉塞瓶子不滑落为宜。）然后放入高压锅里高压灭菌，待高压锅喷嘴喷出蒸汽时，扣上压力阀，从压力阀喷气时起计时，连续维持15－20分钟后关火，压力消失后，打开锅盖，取出配养基，放入接种箱内待用。初次实验时，灭菌后的培养基应放置三五天后，观察无霉菌生长时才能使用。如有霉菌长出，这说明灭菌时间不够，，需要适当增加灭菌时间。

接种
将灭菌后的配养基、无菌水、消毒药水及使用的器材放入接种箱内，因接种箱内的体积相对较小，所以所用的一切物品都要有序地摆放在相应的位置上，不能随意摆放，箱内湿度较大，点酒精灯一定要是用打火机，不要使用火柴。要特别注意准备好装污水、污物的容器，尽可能地大一些，因为操作时是不容许开箱取物的。把所有的物品放置好以后，将一装有10－20ml福尔马林的磁杯放入箱内（最好不要使用玻璃杯，因反应时温度较高，容易炸裂。），倒入2－5g高锰酸钾（PP粉），使其蒸气充满箱内，达到灭菌的效果。这时要将接种箱的通气孔和操作孔封闭好，避免甲醛蒸气很快散尽。待箱内蒸气散尽后，才能开始接种工作，这段时间大约需要5－10个小时。

接种时，揭去密封在接种箱通气孔和操作孔上的密封物，取出熏蒸用的磁杯，将接种用的材料送入接种箱内，开启紫外线灯，十五分钟后关闭紫外线灯，开启照明灯，即可开始工作。操作时一定要树立无菌观念，要把一切物品都看成是带菌的，要时时都注意防范。工作是由于箱内温度较高，湿度较大，手容易出汗，所以每接种一瓶后都要用酒精擦拭手指，也可以戴指套。另外，操作时要注意防火，由于空间较小，一不小心就容易烧伤手指或引起酒精起火。打开瓶塞时，要将瓶口置于酒精灯上方，用右手的无名指和小指夹住棉塞尾，轻轻将棉塞拔出，棉塞不能置于箱内物品上，应用手指夹住，接种后，将瓶口在酒精灯上烧灼一下，棉塞也烧灼一下，，然后在酒精灯火焰上方轻轻塞好，扎好包头纸，用铅笔标明品种、接种日期、编号等，然后重复下一瓶。
其实，用接种箱接种与超净工作台相比较，工作时人要感觉舒适得多。污染率也是很低的，操作熟练后几乎没有什么污染发生。接种后愈伤组织分化、小苗分化、生长状态与在超净台上接种的没有什么两样。

培养
在家庭的业余条件下培养培养的条件不可能得到专控，所以要充分的利用自然条件，接种后的培养瓶可以放在有较强散射光的地方，如靠窗的书柜、写字台上，但要避免日光直射，一般室温在22－28摄氏度时都能正常生长，不是特殊的品种不需要特殊的护理。如室温太低，可以用纸板、木条、塑料薄膜做一个简单的培养箱，里面装一两个15－25瓦的白织灯，既可以补助光照也可以提高培养的温度。夏天温度过高时，有条件的可以摆放在空调室内，，没有空调室的，降温虽然困难一些，但大多数试管苗是可以耐受的，不至于死去。小苗长出后，摆放在书柜或工作台上，感到自己培养出来的生机勃勃的小生灵，无疑是一种享受。

栽培
当小苗长到一定的时候，就可以配置一些生根配养基将小苗转移培养生根，待长出一定根系时，就可以出瓶种植了。小苗出瓶种植的时候一定要注意以下几个方面，一是要适当降低温度；二是要增大湿度；三是要严格控制杂菌危害；四是要保证种植介质的疏松透气；五是要保证适当的光照。我通常是用跖石、木屑、稻谷壳混合作基质，把小苗种植后用百菌清喷雾浇根，盖上塑料薄膜，少量的小苗干脆用玻璃杯盖住，大约15天后就能揭去覆盖物，便可进行正常管理了。

家庭开展组培其实也并不是一件什么很困难的事情，只要多开动脑筋，多想一些办法，做起来也是很容易地。万事开头难，办法总比困难多。我1974年在一个县烤烟研究所里当所长，原来条件不允许，科研经费很紧张，刚开始的时候，一年的科研经费只有3000元，那年我做过烟草的花药单倍体、水稻花药培养、柑桔胚乳培养、黑皮果蔗茎尖组织培养、田三七愈伤组织培养、黑节草（石斛）种子的无菌培养、体细胞融合，都获得了很好的成绩，我们就是用这种方法做的，当时北京、上海很多的研究单位来看了很吃惊，他们认为很珍贵的组培小苗，被我们丢得到处都是，觉的不可思议，他们做不出来的，竟然在我们一个十分闭塞的山区里可以做出来。我说这个话的意思不是为自己吹嘘摆功，而是告诉想从事这个行业的朋友，不要自己把自己的能量看得太低，也不要迷信权威、只要自己有信心，严格地按照科学的规律去做，没有什么做不了的，没有什么办不到的。

家庭组培培养基的选择与效果评价

选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。

选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑：一是基本培养基；二是各种激素的浓度及相对比例。

MS培养基适合于大多数双子叶植物，B5和N6培养基适合与许多单子叶植物，特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效，White培养基适合于根的培养。

首先试用这些培养基进行初步实验，可以少走弯路，大大；减少时间、人力和物力的消耗。当通过一系列初试之后，可再根据实际情况对其中的某些成分做小范围调整。

在进行调整时，以下情况可供参考。一是当用一种化合物作为氮源时，硝酸盐的作用比铵盐好，但单独使用硝酸盐会使培养基的PH向碱性方向漂移，若同时加入硝酸盐和少量铵盐，会使这种漂移得到克服。二是当某些元素供应不足时，培养的植物会表现出一些症状，可根据症状加以调整，如氮不足时，培养的组织常表现出花色苷的颜色（红、紫红色），愈伤组织内部很难看到导管分子的分化；当氮、钾或磷不足时，细胞会明显过度生长，形成一些十分蓬松，甚至呈透明状的愈伤组织；铁、硫缺少时组织会失绿，细胞分裂停滞，愈伤组织出现褐色衰老症状；缺硼时细胞分裂趋势缓慢，过度伸长；缺少锰或钼时细胞生长受到影响。

培养基外源激素的作用也会使培养物出现上述一些类似的情况，所以应仔细分析，不可轻易下结论。

Answer 3

植物组织培养一般的的流程

Answer 4