艾滋病核酸检测的检测技术
核酸提取均采用磁珠法。
1)磁珠提取的原理:
将磁珠上标记特异性吸附核酸的物质特异性吸附核酸,并通过磁分离技术将病毒核酸从裂解液中提取出来。
2)步骤:
裂解—吸附—洗涤—洗涤—洗涤—洗脱
3)优点:
a.磁珠提取特异性高,受标本因素影响小,灵敏度高
b.易于实现自动化
4)缺点:
a.成本较高、并需要一定的仪器(半自动、全自动)。
b.完全手工工作,工作量太大。 根据HIV-1 gag.pol和env基因序列设计了套式聚合酶链反应(nesled polymerasechain reaction,nPCR)引物。将外周血单个核细胞裂解液先用外侧引物扩增,其产物再经内侧引物扩增,直接走凝胶电泳判定结果。nPCR的敏感性。较常规PCR高100~1000倍,可检测到0.5fg质粒DNA和50μ1HIV-1感染者外周血样中的HIV基因。
根据专业文献记载,用本法检测63名HIV-1感染者全为阳性,而61名健康人和可疑者均为阴性,后者经追踪检测抗体排除了HIV-1感染。
由此可知,nPCR是一种敏感性极高、特异性很强、操作简便易行的HIV-1基因检测技术。它已经在早期诊断和外周血病毒含量检测中发挥了重要作用,而且有着更广阔的应用前景。
检测的优点
人体感染艾滋病病毒后,一般需要2-12周,平均42天左右血液中才可检测到HIV抗体。在这段时期内,常规检测技术根本无法检测出HIV病毒,这就是常说的“HIV窗口期”。“窗口期”的存在,也解释了为什么一些病人在接受了正规医院输血后却感染艾滋病的原因。
在感染过程中,首先出现的是病毒RNA,这时可以用PCR的方法检测出来,之后出现的是IgM抗体,使用双抗原夹心法即可以检测出来,然后出现的是IgG抗体,使用间接法可以检测出来。
现在省市疾病控制中心和检测试纸,使用的检测方法都是检测抗体抗原,无法避免“HIV窗口期”因素的干扰。所以说,常规检测技术在HIV窗口期内存在重大缺陷。