在pH是7.5的缓冲液中,样品是组氨酸,精氨酸,谷氨酸,电泳后它们的迁移情况是什么
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三种氨基酸的PI值分别是,Arg:10.67 His:7.59 Glu:3.22
并且,在等电点以上的任一PH,氨基酸带净负电,因此在电场中向正极移动。在一定PH的范围内,氨基酸溶液的PH离等电点越远,氨基酸所携带的净电荷量越大。
然后看用什么方式电泳了,不同的电泳会有不同的迁移情况。但分析的原理是一样的。
亮氨酸PI是5.9,精氨酸等电点在10左右,pH6.8的体系亮氨酸带负电精氨酸带正电,二者电泳方向相反。
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注意事项:
凝胶正负极不要弄反向了,控制电压及电泳时间,严控条带跑出点样时,点样量不要溢出点样孔,注意枪头捅破点样孔的凝胶。
电泳时需要marker做对照,用于验证目拟标片段的大小,电泳缓冲液需定期更换相信做到以上几点,应该问题不大。
电泳缓冲液:为保持电泳所需的离子强度和pH,应常更新电泳缓冲液。
样品加入量:一般情况下,0.5cm宽的梳子可加0.5μg的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片段的数量和大小而定。当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辩认不清;反之则应适当减少加样量,但是上样量过多会造成加样孔超载,从而导致拖尾和弥散,对于较大的DNA此现象更明显。
参考资料来源:百度百科_电泳