Question

为什么使用丙酮沉淀蛋白质，要在低温0-4℃进行

Answer 1

常温或升温时，蛋白立体结构展开， 丙酮极容易与其中的色氨酸、酪氨酸等氨基酸进行疏水结合导致蛋白变性，所以我们通常预冷丙酮并且低温操作。

Answer 2

丙酮沉淀蛋白质是一种常用方法,在温度较高和沉淀时间过长都容易引起蛋白质变性，丙酮沉淀蛋白质要求一定在低温下进行，一般 -20——4 度，不仅加丙酮需在冰浴上进行，离心时也要用低温离心机。时间一般不超过4h，温度低可延长时间。温度较低蛋白质沉淀较快。
在蛋白质溶液中加入大量中性盐，蛋白质胶粒的水化层即被破坏，其所带电荷也被中和，从而使蛋白质发生沉淀，这种盐析沉淀蛋白质的优点是不发生变性，硫酸铵沉淀蛋白质即为盐析作用；而在蛋白质中加入丙酮等有机溶剂，可破坏蛋白质的水化膜而使其沉淀，在常温下，有机溶剂沉淀蛋白质往往引起变性。