Question

细胞培养污染的问题

这是仅仅在培养瓶里面放了完全培养液，没加细胞，37度孵箱空养两天后的结果，那些小疙瘩是什么，有谁遇到过这种情况。
因为养3T3-L1细胞快一个月了，老是污染。1到3代的时候情况还行，但是到第4、5代的时候，第一天情况还行，培养液还是清的，第二天早上再看就混了，变成粉红色，已经两次出现这种情况，而且第二次是全军覆没，请教各位大侠怎么办？
之前的污染都是每一代第一天的时候培养液是清的，第二天变混，可以看见细胞间隙有 很多在动的小东西，小杆状，比细胞小很多，很多，可能会是什么？
培养液放在孵箱里面过了两夜也还是好的，胎牛血清也是清的？
可能会是哪里出了问题？
换了一批细胞也是这个样子，昨天用我的培养液传代，今天光镜下就出现那些小杆状的东西，很小，很多很密，但是别人的用自己的培养基在养的那一批就没有出现这种情况，是不是和我的培养基有关？

基本上培养基都是用完就放4度保存，用前37度，操作中也很注意，是和带教的实验老是一起做的，青链也加了，我看有的文献当中加两性霉素B的，但是我们实验室都不加 。
不知道是不是我的培养基，或者血清出了问题？求教！

Answer 1

“细胞间隙有 很多在动的小东西”可能是黑胶虫，是血清里的。可以把血清放在培养箱培养两天，用400倍观察下是否有会动的黑黑的（但不大像杆状），如有则是黑胶虫。如果有这种情况出现就要换血清了，据说最好的是北美血清但比较贵，澳洲血清也不错的，但是我们这边实验室也有用澳洲血清也有少量黑胶虫出现，也没办法。
培养基应该不大容易出问题的，双抗一般都是用青链的，当然也有可能你的细胞原本就有污染的。支原体污染用显微镜是看不出来的。

Answer 2

支原体 立克次氏体污染 它们属于专性胞内寄生微生物 动物细胞培养最怕的就是这个 污染原因跟血清 种细胞 操作有关 你接入的细胞可能有它们寄生 换一下细胞试试

Answer 3

一个可能是培养基没保存好，不要在室温放太久，用完就放回4度保存。
二是你操作中间要仔细，移液管、瓶口、培养皿之间是不能接触的。
三有的培养基是要加双抗的，只有极特殊的不用。

Answer 4

可能是细菌。