Question

血液RNA该如何提取

Answer 1

BIOG 产品特点

◎操作简便快速，20分钟左右可获得理想的RNA；

◎提取RNA纯度高，无抑制剂，1.8<A260/A280≤2.0；

◎产量更高，较国内同类产品高出20%；

◎样本范围广，可用于新鲜、冷冻或陈旧的全血样本。

产品介绍

BIOG Blood RNA Isolate Kit专门用于血液RNA的提取纯化。本试剂盒采用独特的裂解液配方，可直接从新鲜、冷冻或陈旧的全血中提取高质量的基因组RNA，也可以直接提取得到血液中感染的微生物或转移的肿瘤细胞RNA， 省去了一般血液RNA提取试剂盒所需的白细胞分离步骤，操作简便快速，只需20分钟左右即可完成血液RNA提取，并且RNA提取得率较高，可在200 μl 全血中提取2-5ug左右基因组RNA。BIOG Blood RNA Isolate Kit采用了最新的优质离子膜，裂解液和洗脱液经过多次优化，提取得到的RNA纯度更高，最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染，可以直接应用于Northern 杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR等。

操作步骤   （ 请自行准备无水乙醇和1.5mLRNase-free灭菌离心管 ） ：

1. 取出洗涤液，按以下操作：

a) 洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇，混匀。

b) 洗涤液B：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。

2. 取1.5mLRNase-free灭菌离心管，加入200μL血液样本，再加入200μL 裂解液及40μL 消化液，振荡混匀，65℃水浴10 分钟。

3. 加入150μL异丙醇（总体积的25%），混合均匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。

4. 将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液；

5. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液。

6. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液。

7. 按每份样本40μL 取洗脱液（如10份提取样本，即取400μL 洗脱液），放置于灭菌1.5mL离心管，65℃预热。

8. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 离心2 分钟，离去残留的洗涤液。

9. 取出吸附柱，放入新的1.5mL RNase-free灭菌离心管内，在吸附柱中心加入40 μL预热洗脱液，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，收集RNA溶液。提取的RNA即可用于下一步实验或-70℃保存。

注意事项：

1.裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。

2.如血液量不足200μL，请用0.85% 生理盐水补至200μL；如血液量超出200μL，请使用BIOG中量血液RNA提取试剂盒或BIOG血液富集RNA提取试剂盒。

3. 如果提取的血液为鸟类、禽类的血液，因有核红细胞较多，提取血液量应适当减少，研究者应先进行优化实验，选择合适用量。

4.为防RNA酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水。

5.提取的RNA如暂不使用，应-70℃保存，可适当加入RNA保护因子（货号：51090，一般40μLRNA溶液加入2μL）。