Question

在检测临床标本是否带有pml-rara融合基因时，哪些是阳性对照？哪些是阴性对照

Answer 1

近十余年来，由于全反式维甲酸和三氧化二砷的应用，采用双诱导治疗能够使得 APL的初期诱导缓解率达到90%以上。药物诱导治疗之后，给予短程化疗和结合以维甲酸和三氧化二砷的药物进行维持治疗，可以使病人在2年左右的时间结束治疗并且临床治愈率闻达90%Ο
目前，APL的病因尚不明确，但是随着分子生物学、细胞遗传学等学科的快速发展， 人们对于APL分子生物学发病机制有了比较深入的了解。超过90%的APL发病的关键机制为T (15 ；17) (Q22 ;Q21)，导致15号染色体上PML基因和17号染色体上的RARa基因形成 PML-RARa融合基因。易位使15q22上的PML基因与17q21上的维甲酸受体Α基因发生交互性重排，分别在15号染色体上形成PML-RARa融合基因和RARa-PML融合基因。研究表明， 患者的白血病细胞均有PML-RARa融合基因的表达，仅有70% 80%的患者同时表达PML-RARa 融合基因，说明PML-RARa融合基因是致病的关键。根据PML断裂点的位置不同，PML-RARa 融合基因有三种亚型Bcrl、Bcr2和Bcr3，分别称为长型(L型)、变异型(V型)和短型(S型)， 发生的概率则依次为55%、5%和40%。PML-RARa融合蛋白作为一种变异的维甲酸受体，相较于野生型RARa蛋白具有不同的DNA特性,是维甲酸(Retinoic Acid,RA)信号的抑制物,通过不同的途径称为内在而有效的RARa靶基因转录因子抑制物。
因此，当患者检测出PML-RARa融合基因突变时，可作为急性早幼粒细胞性白血病的诊断依据，也可作为对全反式维甲酸和砷剂治疗疗效预测的分子标志。
目前可用于PML-RARa融合基因的方法有探针杂交法、基因芯片法、质谱法、基因测序法及免疫荧光法等。探针杂交法假阳性率较高；基因芯片法成本高、制备方法繁琐；质谱法难以在普通医疗机构开展；基因测序法虽敏感性和特异性高，但价格比较昂贵，而且操作较繁琐，耗时较长。免疫荧光法检测PML-RARa融合基因定量表达可高通量完成临床样品检测，且特异性和敏感性都很高，其敏感性和特异性均高于直接免疫荧光检测等方法。实时荧光定量PCR (Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应)与免疫荧光法相比具有特异性增强、灵敏度提高和检测快速、降低了污染等特点，且目前尚未有实时荧光定量PCR方法检测PML-RARa融合基因。CN 102925558 A书明说2/11 页发明内容
为了解决现有技术的问题，本发明实施例提供了一种采用荧光定量PCR技术检测 PML-RARa融合基因MRNA表达量的试剂盒。所述技术方案如下
一种检测PML-RARa融合基因MRNA表达量的试剂盒，包括检测用引物、荧光探针、 CDNA第一链合成试剂、荧光定量PCR混合液、阴性对照和阳性对照，所述检测用引物、荧光探针包括PML-RARaL融合基因引物、PML-RARaV融合基因弓丨物和PML-RARa S融合基因引物中的至少一种和内参基因ABL引物及Taqman荧光探针，其中
PML-RARa L融合基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO: I所示；
PML-RARa L融合基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:2所示；
PML-RARa L融合基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:3所示；
PML-RARa V融合基因上游引物序列如序列表中SEQ ID N0:4所示；
PML-RARa V融合基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:5所示；
PML-RARa V融合基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:6所示；
PML-RARa S融合基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:7所示；
PML-RARa S融合基因下游引物序列如序列表中SEQ ID N0:8所示；
PML-RARa S融合基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:9所示；
ABL基因上游引物序列如序列表中SEQ ID N0:10所不；
ABL基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO: 11所示；
ABL基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO: 12所示；
所述CDNA第一链合成试剂含有MgCl2、逆转录酶缓冲液、DNTPs、RNA酶抑制剂、 Oligo (DT) 15、AMV逆转录酶和无RNase去离子水；所述荧光定量PCR混合液含有PCR预混合液、Mg2+、DNTPs、DUTP、Taq 酶、UNG 酶和无 RNase 去离子水。
进一步地，所述试剂盒还包括内部阳性控制序列、内部阳性控制序列的引物和 Taqman荧光探针，其中内部阳性控制序列如序列表中SEQ ID NO: 13所示；内部阳性控制序列的上游引物如序列表