Question

邻二氮菲分光光度法测定铁中为什么有关条件实验均以水为参比,但测绘标准曲线和测

Answer 1

试剂空白不止含有水，还含有其他物质，而这些物质都有吸光值，该试验测定的是二价铁离子，所以空白试液必须把样品中除了二价铁离子以外的有吸光值的物质因素扣除，而用水为参比则没有考虑这些杂质，算出的吸光度不准确，最终影响测量结果。 含铁的溶液中其他的物质也有吸光度，会影响铁的吸光度的测定，所以要排除这部分溶液的影响，用到参比溶液，就是你含铁溶液中的没有待测物的溶液。

Answer 2

试剂空白不止含有水，还含有其他物质，而这些物质都有吸光值，该试验测定的是二价铁离子，所以空白试液必须把样品中除了二价铁离子以外的有吸光值的物质因素扣除，而用水为参比则没有考虑这些杂质，算出的吸光度不准确，最终影响测量结果

Answer 3

一、实验目的与要求

1、掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理及方法

2、熟悉吸收曲线和标准曲线的绘制方法

3、了解754型分光光度计的构造及使用方法

二、实验原理

分光光度法的理论基础是朗伯-比尔定律，其数学表达式为：A=ε·b·C

A：吸光度，ε：摩尔吸光系数，C：吸光物质的量浓度（mol/L），b：溶液液层厚度（cm）。由于在入射波长一定时，ε对某一吸光物质是一个常数。当有色溶液的液层厚度（b）一定时，溶液的吸光度只与溶液的浓度成正比。

用邻二氮菲测定微量铁，方法准确度高，重现性好。在pH=2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲反应生成橙红色配合物，其lgK稳=21.3，吸光摩尔系数ε=1.0×105，反应式如下：

利用分光光度计测出溶液的吸光度，就可以算出溶液的浓度。

三、实验仪器与药品

722型分光光度计，容量瓶（50ml 8个/组），吸量管（1ml、2ml、5ml）

铁标准溶液（100μg/ml）：准确称取0.7022g(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O置烧杯中，加入20ml 1:1HCl及少量蒸馏水溶解，移至1 000 ml容量瓶定容，摇匀。10%盐酸羟胺溶液（临用时现配制）；0.15%邻二氮菲溶液（临用时现配制，先用少量乙醇溶解后，再以水稀释）；6mol/L1:1HCl 溶液。HAc—NaAc缓冲液：pH=4.6称取136g A.R NaAc，加入120ml冰醋酸，加水稀释成500ml。

四、实验步骤

1、配制铁标准系列及未知样溶液

⑴铁标准系列的配制

取6个50ml容量瓶，分别加入铁标准溶液（100μg/ml）0.00，0.40，0.80，1.20，1.60，2.00ml，每个容量瓶中分别加入10%的盐酸羟胺1ml，HAc—NaAc缓冲液5ml，0.15%邻二氮菲溶液2ml。注意每加入一种试剂后，应摇匀再加入另一种试剂，最后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀放置10分钟后测定。

⑵试样溶液配制

取2个50ml容量瓶，移取1.00ml未知样溶液，按上述配制方法进行。

2、绘制吸收曲线并选择吸收波长

取铁标准系列中3号溶液于1cm比色皿中（比色皿用待装液润洗3次）放入分光光度计中，用试剂空白作参比，在波长460，480，500，510，520，530处测吸光度值，以入射光波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线。选择最大吸光度对应的波长为测量波长，即λmax。

3、绘制标准曲线及铁的测定

用1cm比色皿，以试剂空白溶液为参比，在选定的测量波长（λmax）处，依次测定各标准溶液的吸光度，以铁的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

在相同条件下测定样品的吸光度。

五、数据处理

根据样品溶液的吸光度，在标准曲线上查出对应的浓度值，然后乘以稀释倍数，即为原未知样品的原始浓度。

六、思考题

1、实验中盐酸羟胺、HAc-NaAc缓冲溶液的作用？

2、什么是吸收曲线？在本实验中测定吸收曲线的目的是什么？

3、什么是标准曲线？