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PCR是用来将目的基因扩增的方法,要获得目的基因要用别的方法。
酶切
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研载生物科技(上海)有限公司_
2023-04-12 广告
2023-04-12 广告
书上给的: 基因工程流程的第一步就是获得目的DNA片段,如何获得目的DNA片段就成为基因工程的关键问题。所需目的基因的来源,不外乎是分离自然存在的基因或人工合成基因。常用的方法有PCR法、化学合成法、cDNA法及建立基因文库的方法来筛选 ...
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PCR是根据建基互补的原则来进行DNA扩增的。用PCR来获得目的基因,是依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物(即上游引物,下游引物)。通过PCR的变性--退火--延伸三个基本反应,在引物区间内的基因就能大量被复制,达到钓取基因的目的。
PCR三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时 聚合酶链式反应
间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
PCR三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时 聚合酶链式反应
间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
参考资料: http://www.gbcbio.cn/Products/DNA/Blood_DNA_Kit.htm
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准确地说是pcr将已有的目的基因进行大量扩增。
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朋友,如果你感兴趣的话,我们上课时老外的课件应该能让你明白这一过程,如果需要把你邮箱发我,我直接给你发过去。
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将目的基因进行扩增。
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