MTS法测定细胞增殖的原理?该方法与MTT法有何不同?
我的课题是做一个药物的促增殖作用但是药物本身具有还原性使用MTT法的时候药物直接会和MTT发生显色反应有人推荐MTS法但是我对该方法不甚了解请多多指教谢谢...
我的课题是做一个药物的促增殖作用
但是药物本身具有还原性
使用MTT法的时候药物直接会和MTT发生显色反应
有人推荐MTS法
但是我对该方法不甚了解
请多多指教
谢谢 展开
但是药物本身具有还原性
使用MTT法的时候药物直接会和MTT发生显色反应
有人推荐MTS法
但是我对该方法不甚了解
请多多指教
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MTS法原理:被测物质溶液的颜色或加入显色剂后生成的有色溶液的颜色,颜色深度和物质含量成正比,则根据光被有色溶液吸收的强度,即可测定溶液中森缓旅物质的含量。
跟MTT法区别如下:
一、指代不同
1、MTT法:利用有色物质对特定波长光的吸收特性来进行定性分析哪睁的一种方法。
2、MTS法:是一种检测细胞存活和生长的方法。
二、原理不同
1、MTT法:为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。
2、MTS法:以生成有色化合物的显色反应为基础,比色分析对显色反应的基本要求是:反应应具有较高的灵敏度和选择性,反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定,它和显色剂的颜色差别较大。选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件,是比色分析的关键。
三、用途不同
1、MTT法:方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
2、MTS法:采用具有分光系统(单色器)及检测器的分光光度计,使测定结果准确、省时,选择性好。
参考资料来源:百度百科-比此凳色法
参考资料来源:百度百科-MTT法
天健创新
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MTS检测方厅拿法是检测细胞增殖、细胞毒性的常用方法。具体方法:
细胞生长检测:MTS检测法
1.培养IL-2依赖细胞厅袭株CTLL-2细胞或HT-2细胞(检测IL-2),或者IL-3依赖细胞株FDC-P1细胞或FL5.12细胞(检测IL-3)到对数生长期。
2.取96孔细胞培养板,每孔加0.1ml含1×104~2×104上述细胞之一的DMEM培养液(加10%小牛血清)。
3.每孔加0.1ml系列稀释的待测细胞因子(IL-2或IL-3)样品或细胞因子标准品,在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24小时。
4.每孔加20μl MTS/PMS混合液,继续培养3~4小时显色。
5.检测前摇晃培养板10秒钟,混匀颜色。在酶联检测仪上,波长570nm(或490nm,或570nm和690nm)处检测各孔的光吸收值(OD)。用样品稀释度对OD值(OD570、OD490或OD570/OD690)绘制剂量-反应曲线,根据标准品曲线扮伏搭计算样品中细胞因子的量。
细胞生长检测:MTS检测法
1.培养IL-2依赖细胞厅袭株CTLL-2细胞或HT-2细胞(检测IL-2),或者IL-3依赖细胞株FDC-P1细胞或FL5.12细胞(检测IL-3)到对数生长期。
2.取96孔细胞培养板,每孔加0.1ml含1×104~2×104上述细胞之一的DMEM培养液(加10%小牛血清)。
3.每孔加0.1ml系列稀释的待测细胞因子(IL-2或IL-3)样品或细胞因子标准品,在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24小时。
4.每孔加20μl MTS/PMS混合液,继续培养3~4小时显色。
5.检测前摇晃培养板10秒钟,混匀颜色。在酶联检测仪上,波长570nm(或490nm,或570nm和690nm)处检测各孔的光吸收值(OD)。用样品稀释度对OD值(OD570、OD490或OD570/OD690)绘制剂量-反应曲线,根据标准品曲线扮伏搭计算样品中细胞因子的量。
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