Question

植物抗病基因工程的研究进展有哪些

Answer 1

1　获取和构建单链抗体基因及建立抗体基因库　　抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因分别由四个相对保守的骨架区(FR)、三个抗体互补决定区(CDR)组成，FR呈β片层结构，碱基组成和排列顺序较稳定，因此可据FR碱基组成，合成扩增VH和VL基因的寡核苷酸引物，经聚合酶链反应(PCR)获得VH和VL基因。 1.1　从杂交瘤细胞中获取和构建V基因　从杂交瘤细胞中提取总RNA，经反转录成cDNA，经PCR扩增抗体重链可变区基因和轻链可变区基因，经一人工合成的一条寡核苷酸序列(Linker序列)将VL的C端与VH的N端相连，建成单链抗体基因即：VH-Linker-VL。 Linker的长度认为12～25个氨基酸残基较合适，Linker既能使VH、VL自由折叠，暴露抗原结合点，也可减少蛋白酶的攻击，防止抗体聚集。Huston等设计了一15肽序列的Linker，其X 线衍射分析，此连接肽将VH的C端和VL的N端连接后，不影响ScFv的二级结构，有助于恢复S cFv的天然结合力，具有较好的稳定性和活力［1］。 1.2　从人淋巴细胞中获得和构建V基因　通过杂交瘤细胞获得的单链抗体虽然去掉了Fc段，大大降低了抗体的免疫原性，但由于整个V区框架是外源性的，所以或多或少保留了部分抗原性，而直接从感染某种或接触某种抗...