Question

抽提的rna有蛋白污染影响rtpcr吗

Answer 1

rtpcr时提取rna的浓度和纯度要求：浓度20ng/ul以上足够了，如果用的是组织提取，浓度一般很高，可以达到几百甚至几千。如果你用的是病毒、少量细胞，浓度低一些也没有关系。　　纯度需要用仪器测一下。260/280理论值应该有2.0以上，260/230值1.2以上基本合格。　　RT-PCR：最重要的是RNA是否有明显降解，这个需要跑电泳看。一般来说28S应该比18S亮1.5-2.0倍，说明提取得不错。　　反转录·聚合酶链反应（reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR）是将RNA的反转录（reversetranscription）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。　　提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用反转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板经行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。