Question

农博金草金线莲种子需要用培养皿养护吗？

Answer 1

1培养基组成及培养条件
诱导培养基：MS＋6-BA1mg/L＋NAA0.1mg/L；增殖培养基：MS＋6-BA1mg/L＋NAA0.1mg/L；生根培养基：1/2MS＋IBA0.2mg/L。
培养基处理：上述MS培养基含蔗糖3%，琼脂0.7%，pH5.8。培养条件：温度（25±1）℃ ，每天光照14h，光照强度2000Lx。

2外植体选择与灭菌
进行组织培养时，我们一般选择旺盛的分生组织如茎尖、芽、嫩梢和茎段等作为外植体，但是我们具体选取部位要根据不同植物自身的特点做出判断。因为幼苗的幼嫩茎尖、叶片等部位具有方便采摘及后期处理，且容易形成愈伤组织的特点，所以我们在选取组织培养的材料时更多选择幼苗叶片进行组培处理。
取当年生发育健壮、长势旺盛且无病虫害的幼苗植株叶片或幼嫩的芽等为材料。将材料切下后,用自来水冲洗1～2小时，再用饱和洗涤液浸泡5-10min，用无菌水冲洗10-15min，除去表面残留物，然后在无菌状态下用70%酒精浸泡20s，无菌水冲洗1次，再用0.1%的升汞浸泡消毒5-6min，最后用无菌水冲洗4-5次，每次1-2min，用吸水纸吸干外植体表面的水分，在无菌条件下，将叶片切取5mm×5mm大小接种启动诱导培养基上培养。培养温度为24℃±2℃，光照强度为1500lx，每天光照10小时左右。

3幼苗的初代培养
查阅资料时已经知道，只有在最适条件下，才能使培养的幼苗叶片更好地发育以及更快地出芽。我已知在培养基处于最佳的组成和浓度下，幼苗叶片更易形成愈伤组织，更容易诱导出芽；培养基浓度或高或低，都会对幼苗愈伤组织以及芽的发育产生影响，严重的时候甚至导致外植体地死亡。
因此，我们根据实际情况将灭菌后切好的叶片或腋芽等接种在0.7%琼脂固化的MS培养基上,附加NAA0.1毫克/升、BA0.1毫克/升、葡萄糖或蔗糖3%,pH值调至5.8。置于25～30℃、光照强度1500～4000lx、每日光照14小时的培养室中培养。接种于诱导培养基上的外植体3周左右开始萌动，1个月后,可见叶片、或腋芽外殖体膨大,进而形成大量的愈伤组织和芽丛,每块外殖体平均可产生30～40个不定芽。

4幼苗的继代培养
初代培养会产生大量的无根幼苗，我们要时刻观察幼苗的长势，当植株长满瓶子时，就需要我们从中下部切下初代培养中分化产生的幼苗幼苗，选择长势良好的茎尖组织进行后续培养。在这个过程中，首先我们要从试管中提取培养情人草幼苗，用镊子摘除老化的叶片和茎杆。将选择健壮的幼苗叶片进行再次切割后置于继代培养基中，放回组培室进行继续培养。我们选择25天为一个周期，如此反复继代几次，就可以得到大量幼苗组培苗。
我们时刻观察，待诱导长出2-3cm的无菌芽时，将较大的丛生芽从初代培养的愈伤组织上切下，转接到继代培养基上，或将小的丛生芽直接转接到继代培养基上。采用MS基本培养基附加1ppm6-BA作为继代培养基，对丛生芽进行继代培养。小芽长大后,将其转入MS附加NAA0.1毫克/升、BA0.1毫克/升的培养基上,小芽可进一步发育长大,并形成小苗。如此经过1个月的继代培养后，丛生芽以20～30倍的速率增长，经半年后即可得到大量优质组培苗。

5幼苗的生根培养
因为继代培养过程中幼苗愈伤组织只能分化出不定芽和侧芽等，但不能诱导产生根的分化，必须在生根培养基上才会诱导根的形成。因此我们要随时观察幼苗长势，当继代培养的幼苗长出3~5片小叶时就应该将无根苗由幼苗基部切出，注意不能损伤幼苗，在无菌操作台内转移幼苗至生根培养基内。
在一定条件下，组培幼苗可直接移栽到基质中，经20天左右即可长出根来。但是，为得到大而健壮的组培苗，可将无根组培苗转接到1／2MS附加0.1ppmNAA的培养基中，2周后，当基部长出小根时即可移栽。这样的苗较前者长势好，成苗快。

6幼苗组培苗的炼苗与移栽前准备
当试管苗高至2～3厘米、具3～5片叶片、根系发育良好时,将其转入驯化室中,应该封闭瓶口进行炼苗。这一时期可适当增强温室里面的温度和光照，封闭完了7天以后要适应外界环境就开始打开瓶盖,开始开口炼苗，开口炼苗的时候不能一下子开口，开口炼苗的时候第一天要开口三分之一，两天以后开口两分之一慢慢适应外界湿度然后到了第六天的时候瓶子打开，开口炼苗的时间比封闭炼苗的时间长。在20℃左右,适当降低空气湿度的条件下培养1～2周,移栽前2天打开瓶盖,加少量水以软化琼脂，然后取出小植株,将试管苗基部的琼脂冲洗掉，以免滋生杂菌，导致烂根。
试管苗移栽幼苗喜肥沃疏松基质。选择的基质配方为泥炭、蘑菇泥和木糠的比例为2:1:1，可适量添加珍珠岩。移栽前，先将基质在高压灭菌器中消毒15分钟，并选用长宽高为48×30×5cm的种植盘，将基质铺于其中并浇透水，放置片刻，即可将组培苗栽植其中。

7炼苗后移栽
移栽后的幼苗温度宜保持在18℃～25℃，相对空气温度80%左右，并避免阳光直射和保持通风，移栽成活率可达 90 %以上。小苗移栽初期不需施肥，每隔3～5天喷一次水。移栽20天后，小苗开始快速生长，此时每周浇一次营养液。待小苗在种植盘中逐渐长大到比较拥挤时，可上盆定植，仍选用前述基质。为更好地固定根系，在基质中混一定比例的河沙。选用的花盆口径为6cm，待苗长大而根充满花盆时，再换10cm口径的花盆，如此操作更有利于幼苗的生长和早开花。

8小结
幼苗是国际流行的室内盆栽花卉，通常用种子繁殖及带叶柄的叶扦插繁殖，不但会出现性状分离、苗木退化、繁殖系数很低，而且需要很长时间才能繁殖出来大量整齐一致的苗木。而组织培养幼苗,取材方便、经济,可在短时间内获得繁殖成功的试管苗。本项研究探讨了利用组织培养技术快速繁殖幼苗的可行方案,为扩大幼苗的繁殖及在较短时间内获得大量优良组培种苗提供科学依据。幼苗组织培养技术蕴藏着无限的发展机遇，合理的利用不仅可以带动地区经济社会发展，相信也会促进我国花卉产业的跨越式发展。而我们探索出的培养条件将为今后组培的幼苗工业化生产奠定了基础