Question

RT-PCR的原理是什么？有何用途？

Answer 1

RT—PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。

原理是提取组织或细胞中的总RNA或者mRNA，在反转录酶的作用下将RNA或者mRNA反转录成cDNA，再以该cDNA第一链为模板进行PCR扩增，根据靶基因设计用于PCR扩增的基因特异的上下游引物，基因特异的上游引物与cDNA第一链退火，在Taq DNA聚合酶作用下合成cDNA第二链。再以cDNA第一链和第二链为模板，用基因特异的上下游引物PCR扩增获得大量的cDNA。

Real-time PCR（实时荧光定量PCR）也可以缩写为RT—PCR，此外还有一个qPCR（Quantitative Rea-ltime-PCR ），有人可能将这三者搞混。

其实Rea-ltime-PCR和 qPCR（Quantitative Rea-ltime-PCR ）都是指实时定量PCR，即在PCR进行的同时，对其过程进行实时监测，可以对起始模板数量进行精确的分析。并且国际上的约定俗成的是：RT-PCR特指反转录PCR，而Real-time PCR一般缩写为 qPCR（quantitative real-time PCR）。

RT-PCR的方法已经广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。