Question

将目的基因导入受体细胞的方法有那些？

Answer 1

外泌体中的miRNA在病变细胞中的应用：miRNA是一类内源性具有调控功能的非编码RNA，可以与靶mRNA的3’非翻译区结合，从而导致靶基因不同程度的差异性表达。当miRNA运送到远端细胞时外泌体可以保持miRNA的完成性。此外，外泌体中miRNA的分泌常用于的诊病态细胞断。总之，外泌体在病变细胞发生发展中有重要作用，作为病变细胞调控的新机制，为病变细胞的治疗提出了新的思路。此外，着眼于外泌体与质膜构造十分相似，可将其作为许多治疗性的药物的运输载体而运用于再生医学方面。(生物谷 Bioon.com）欢迎咨询：上海宇玫博 咨询电话：4006-166-973宇玫博…

Answer 2

• 常用方法：基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌，枯草杆菌，土壤农杆菌，酵母菌和动植物细胞等。其中，对于细菌或植物细胞，常用质粒作为载体将目的基因导入细胞内；动物细胞则用显微注射的方法将目的基因导入动物受精卵的雄性原核中。

• 过程：用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞，主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。例如，如果运载体是质粒，受体细胞是细菌，一般是将细菌用氯化钙处理，以增大细菌细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的繁殖而复制，由于细菌的繁殖速度非常快，在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。

Answer 3

1、常用方法：
基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌，枯草杆菌，土壤农杆菌，酵母菌和动植物细胞等。其中，对于细菌或植物细胞，常用质粒作为载体将目的基因导入细胞内；动物细胞则用显微注射的方法将目的基因导入动物受精卵的雄性原核中。
2、过程：

用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞，主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。例如，如果运载体是质粒，受体细胞是细菌，一般是将细菌用氯化钙处理，以增大细菌细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的繁殖而复制，由于细菌的繁殖速度非常快，在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。

Answer 4

导入植物细胞：农杆菌转化法（转基因抗虫棉用的是花粉管通道法）；导入动物细胞：显微注射技术（注射入受精卵中）；导入原核生物：一般是将细菌用氯化钙处理，以增大细菌细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。

Answer 5

Answer 6

DNA分子杂交技术：

用同位素标记的目的基因片段作探针，与受体染色体DNA进行杂交。

近年来研究者常采用PCR-Southern杂交技术，即先对被检测的材料进行PCR扩增，然后再用目的基因的同源探针与扩增产物进行杂交。

再采用RT-PCR检测转录产物，即以受体总RNA或mRNA为模板进行逆转录合,然后再进行PCR扩增，如果得到特异的cDNA扩增条带，则表明目的基因实现了转录。

最后还需在翻译水平上验证表达，常进行Wester blotting,将经SDS-PAGE分离的蛋白质样品通过电转移到硝酸纤维素膜上，用待定蛋白质的初级抗体与膜上吸附的蛋白质进行免疫反应，再与酶标记的第二抗体反应，通过二抗上标记酶催化的显色反应，就可以鉴定目的基因表达的特异蛋白质产物。