Question

如图1所示，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从基因组DNA上切下目的基因，并将之取代质粒pZHZ1

如图1所示，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从基因组DNA上切下目的基因，并将之取代质粒pZHZ1（3.7kb，1kb=1000对碱基）上相应的E-F区域 （0.2kb），（1）那么所形成的重组质粒pZHZ2______．A．既能被E也能被F切开 B．能被E但不能被F切开C．既不能被E也不能被F切开 D．能被F但不能被E切开（2）已知在质粒pZHZl中，限制酶G切割位点距限制酶E切割位点0.8kb，限制酶H切割位点距限制酶F切割位点O．5kb．若分别用限制酶G和H酶切两份重组质粒pZHZ2样品，据上表所列酶切结果判断目的基因的大小为______kb；并将目的基因内部的限制酶G和H切割位点标注在图2中．（3）若想在山羊的乳汁中收获上述目的基因的表达产物，则需将重组质粒pZHZ2导入至山羊的______细胞中．若pZHZ2进入细胞后插入在一条染色体DNA上，那么获得转基因纯合子山羊的方式是______．（4）上述目的基因模板链中的．TGA序列对应一个密码子，翻译时识别该密码子的tRNA上相应的碱基序列是______．

Answer 1

（1）用限制酶从基因组DNA上切下目的基因，并取代质粒pZHZ1（3.7kb，1kb=1000对碱基）上相应的E-F区域 （0.2kb），用DNA连接酶连接后形成重组质粒，则在重组质粒中仍然含有限制酶E和限制酶F的切割位点，形成的重组质粒pZHZ2既能被E也能被F切开，故A正确．
（2）根据题中信息，原来质粒长度为3.7kb，切去EF（0.2kb）之后还有3.5kb，插入目的基因后形成重组质粒，重组质粒的长度为1.6+3.1=1.2+3.5=4.7kb，进而可推导出目的基因长度为4.7-3.5=1.2kb．重组质粒中G的切割位点距E的切割位点0.8kb，单独用限制酶G切割后产生1.6kb和3.1kb两种片段，说明在重组质粒中除了图中标示出来的G酶切位点外，还有一个G酶切位点；H的酶切位点距F0.5kb，用H单独酶切后产生1.2kb和3.5kb两种片段，说明在重组质粒中除了图中标示出来的H酶切位点外，还有一个H酶切位点；根据题中信息提示“将目的基因内部的限制酶G和H切割位点标注在图中”，可确定在EF之间分别含有一个G和H的酶切位点，进而可断定G的识别位点，在距E点右侧0.8kb处，H的识别位点在距F左侧0.7kb处．
（3）将目的基因导入动物细胞中，通常以受精卵作为受体细胞，当受精卵发育成山羊后，在雌性山羊的乳汁中可以提取到目的基因的表达产物．重组质粒插入在一条染色体DNA上，可通过雌雄转基因山羊杂交的方法来获取转基因纯合子山羊．
（4）根据碱基互补配对原则，目的基因的模板链中碱基为TGA，则mRNA中对应的密码子为ACU，tRNA中的反密码子为UGA．
故答案为：
（1）A
（2）1.2    

（3）受精卵  转基因山羊间相互交配    
（4）UGA