Question

我想知道Western Blot技术的应用及意义是什么

谢谢你了

Answer 1

Western Blot与Southern印迹杂交或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素膜NC膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

Answer 2

如果蛋白表达的改变在蛋白水平，而非在RNA或者DNA水平，比如蛋白修饰，用Southern印迹杂交或Northern杂交方法是检测不出来的，此时用western blot就可以。另外，大多数的功能都是在蛋白水平才有意义。而且western blot的检测相对更为准确。