Question

常见的色谱分离方法有哪些

Answer 1

常见的色谱分离方法有哪些
液相色谱按分离机理分为吸附、分配、交换、排阻以及亲和五种类型.
利用组分在吸附剂(固定相)上的吸附能力强弱不同而得以分离的方法,称为吸附色谱法.固定相是固体,目前这种分离模式在液相色谱中用途很小.
利用组分在固定液或者键合固定相(固定相)中溶解度不同而达到分离的方法称为分配色谱法.固定相是涂覆的固定液或者键合的固定相,是目前主流的分离模式,涵盖了目前液相色谱应用范围的大部.
利用组分在离子交换剂(固定相)上的亲和力大小不同而达到分离的方法,称为离子交换色谱法.该分离模式主要用来分离离子型化合物,正是由于如此,现在离子色谱已经从液相色谱中分离出来,称为离子色谱.
利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的方法,称为凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法.这个主要用来分离高分子子化合物,比如蛋白、比如聚合物.
利用不同组分与固定相(固定化分子)的高专属性亲和力进行分离的称为亲和色谱法,常用于蛋白质分离.

Answer 2

　　常用的蛋白质纯化方法有离子交换色谱、亲和色谱、电泳、疏水色谱等等 离子交换色谱：蛋白质和氨基酸一样会两性解离，所带电荷决定于溶液pH。pH小于pI时蛋白质带正电，pH大于pI时蛋白质带负电。不同蛋白质等电点的蛋白质在同一个溶液中，表面电荷情况不同。离子交换就是利用不同蛋白质在同一溶液中表面电荷的差异来实现分离的。 亲和色谱：生物大分子有一个特性，某些分子或基因对它们有特异性很强的吸附作用。如镍柱中Ni可以与His标签的蛋白结合，这种只针对一种或一类物质的吸附就是亲和色谱的原理。 电泳：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中， 与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。 疏水色谱：疏水色谱基于蛋白质表面的疏水区与介质疏水配体间的相互作用...