Question

PCR产物每个循环增加一倍,最终扩增可达多少

Answer 1

PCR产物每个循环增加一倍，最终扩增可达10倍。

PCR扩增的原理是DNA双链复制，基因呈指数式增长。在PCR反应中，经过n次循环，理论上DNA链的数目扩增了2的n次方，PCR的一个循环，一个DNA模板被复制为2个DNA片段，由于每个循环所产生的DNA片段即为下一个循环的模板，因此反应产量以指数形成增长。

复性温度时间

复性温度决定PCR的特异性，而引物退火温度和所需时间长短取决于反应体系中的基本组成及扩增引物的长度和浓度，实际使用的退火温度要比扩增引物的Tm值低5℃。增加退火温度会增加引物的识别，同时可降低引物3端核苷酸的错误延伸。因此，提高退火温度，特别是在前几个循环中，会增加扩增的特异性。