Question

下表是几种限制酶识别序列及其切割位点

下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注．请回答下列问题： 限制酶 BamHⅠ BclⅠ Sau3AⅠ HindⅢ 识别序列及切割位点 （1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用___两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过___酶作用后获得重组质粒．为了扩增重组质粒，需将其转入处于___态的大肠杆菌． （2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加___平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中___． （3）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为___，对于该部位，这两种酶___（填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开． （4）若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得___种大小不同的DNA片段．

Answer 1

（1）选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHⅠ可能使质粒中的启动子丢失，因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割．酶切后的载体和目的基因片段，通过连接酶作用后获得重组质粒．为了扩增重组质粒，需将其转入处于感受态的大肠杆菌． （2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素．PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链，故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙． （3）根据BamHⅠ和BclI的酶切位点，若BamHI酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，则连接部位的6个碱基对序列为 ，对于该部位，由于与两种酶的酶切位点均不同，故这两种酶都不能切开． （4）根据BamHⅠ、BclI和Sau3A I的酶切位点，Sau3A I在质粒上有三个酶切位点，完全酶切可得到记为A、B、C三种片段，若部分位点被切开，可得到AB、AC、BC、ABC四种片段，所以用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段． 故答案为： （1）BclI和HindⅢ连接 感受 （2）四环素 引物甲和引物丙 （3） 都不能 （4）7