培养基的配制
1.配料:
配方换算→在容器中加入少量水(蒸馏水,自然水)→按照配方称取各种药品(依次加入)→加足所需水量。
2.溶解:
淀粉溶解:少量冷水调成糊状。加热溶解,边加热边搅拌以防止烧焦。
3.调PH:
用1N的盐酸或1N的NaOH把培养基调节到所要求的值。
4.过滤:
滤纸或棉花进行过滤。
5.分装:
一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。
6.包扎:
分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。
7.灭菌:
按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏。
8.贮存:
培养基在30℃下放置一天,无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。
扩展资料
培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。防止污染应该注意以下事项:
确认工作细胞库是否被污染,确认毒种工作种子批是否被污染,确认所用培养基及其添加成分是否被污染,均可用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。
同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中,可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养,48小时即可观察有无污染。
将有毒区与无毒区严格分开,并有各自独立的空气净化系统及孵室,有毒区对无毒区应保持相对负压,防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。
参考资料
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