Question

从原理和仪器上比较紫外--可见分光光度法与荧光分光光度法的异同点

Answer 1

1.原理
相同点：吸光光度法和荧光分析法都是分子光谱。
不同点：吸光光度法是由分子对辐射能选择性吸收由基态或较低能级跃迁到较高能级产生的分子光谱，是分子吸收光谱；而荧光分析法是由分子对辐射能选择性吸收由基态跃迁到单重激发态，当由其第一激发单重态的最低振动能级回到基态各振动能级间的跃迁所产生的分子光谱，是分子发射光谱。
2.仪器
相同点：它们都有光源、单色器、液槽、检测器和信号显示器五部分组成。
不同点：荧光光度计采用垂直的计量方式，在与激发光垂直的方向测量荧光以消除透射光的影响。荧光光度计有两个单色器，一个是激发单色器，置于液槽前，用于获得单色性较好的激发光；另一个是发射单色器，置于液槽和检测器之间，用于分出某一波长的荧光，消除其它杂散光干扰。荧光光度法可以增大发光强度来提高灵敏度，但是习惯光度法测的是吸光度，测定灵敏度不会提高。