Question

琼脂糖凝胶电泳的DNA为什么要酶切

我查文献，看到有些文献上提取质粒DNA，进行双酶切后才进行琼脂糖凝胶电泳，我的实验是提取小鼠的成纤维细胞的DNA后，对抑制因子Smad7进行重亚硫酸盐修饰的PCR，然后琼脂糖凝胶电泳，是不是我的DNA不需要酶切就可以跑胶？我不太明白为什么质粒DNA要酶切后电泳

Answer 1

呃，简单地说，质粒DNA酶切是因为我们之前在质粒上插入了一些目的片段，将质粒转到细菌里，细菌繁殖，再抽繁殖后的细菌里的质粒，就可以得到大量的含有目的片段的质粒，但我们要的是目的片段，质粒上的其他东西要去掉才行，所以要酶切，把我们要的片段切下来，可是切后目的片段与质粒其他片段混在一起，就要电泳把它们分开，把目的片段条带处的胶切下来，纯化，就得到大量的目的片段了。当然，也可以用此方法判断你的目的片段是不是正确插入质粒了。
不知道你具体想干什么，不过感觉你的目的是鉴定成纤维细胞DNA中某一基因的表达情况，那就和酶切无关了，至少和我上面说的那种酶切无关。
Good luck~~~~~

Answer 2

你好：
我所知道的酶切的目的大致分为两大类：载体的检测和southern预备实验。
你做的如果是常规的PCR检测，一般不需要酶切后再电泳，只是检测一下你的目的基因是否成功进入你的受体材料，酶切后反而看不出来了。
酶切的依据是你自己的载体图中酶切位点的位置与类别，根据不同的酶切位点选择不同种类的酶。酶切位点一般设置在你插入的目的基因的两侧，如此一来，经过简单的酶切，就可以将你所需要的目的条带完整的切下来，再经过琼脂糖凝胶电泳将两者分离。在此说一下凝胶电泳的原理，在琼脂糖凝胶的胶微粒之间，存在着能够容许DNA通过的间隙，通过的速率取决于你的DNA的分子量，分子量越大迁移率越慢，反之亦然。
举个例子，你的载体或基因组是10bp，你的目的条带是3bp，对你的材料进行酶切后，一般会出现三条清晰的条带，高度由上至下依次为（越高分子量越大）：
1.酶切不完全残留的完整基因组条带10bp
2.酶切后剩余部分的载体，大约7bp（10bp-3bp）
3.你的目的基因，3bp(10bp-7bp)
不知您明白了没有，如果是PCR的话，一般不需要酶切！（还是同其他人说的一样，要先明确你电泳的目的是什么，然后再看到底需不需要酶切。）

Answer 3

你要具体说说为什么电泳啊……我觉得很可能是看外源片段是不是连进去了啊……