Question

简述亲和层析的原理和方法

Answer 1

简述亲和层析的原理和方法如下：

原理：

将一对能可逆结合和解离生物分子的一方作为配基（也称为配体），与具有大孔径、亲水性的固相载体相偶联、制成专一的亲和吸附剂，再用此亲和吸附剂填充色谱柱。

当含有被分离物质的混合物随着流动相流经色谱柱时，亲和吸附剂上的配基就有选择地吸附能与其结合的物质，而其他的蛋白质及杂质不被吸附，从色谱柱中流出，使用适当的缓冲液使被分离物质与配基解吸附，即可获得纯化的目的产物。

方法：

一、将某一类细胞中所有的蛋白质过含有该类细胞各种片段的DNA层析柱，用低浓度盐溶液洗去不与DNA作用的绝大多数蛋白，用中浓度盐溶液洗脱大部分与能DNA相互作用的蛋白。

二、将第一步得到的能与DNA相互作用的蛋白过只含有特定DNA序列的层析柱，然后用中等浓度的盐溶液洗脱不与该特定DNA序列相互作用的蛋白，然后用较高浓度的盐溶液洗脱并得到与该特定DNA序列相互作用的蛋白。

亲和层析：

概念：

亲和色谱也称为亲和层析，是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。亲和色谱在凝胶过滤色谱柱上连接与待分离的物质有一定结合能力的分子，并且它们的结合是可逆的，在改变流动相条件时二者还能相互分离。

亲和色谱可以用来从混合物中纯化或浓缩某一分子，也可以用来去除或减少混合物中某一分子的含量。

用途：

亲和色谱的用途很广泛，可以用来从细胞提取物中分离纯化核酸、蛋白，还可以从血浆中分离抗体。分离重组蛋白就经常使用亲和色谱。通过基因修饰为蛋白加上一些人为的特性，这些特性使蛋白选择性地与配体结合，从而达到分离的目的。