Question

检测原核表达蛋白没有需要将菌体超声波破碎吗

Answer 1

检测原核表达蛋白不需要将菌体超声波破碎的，原因如下：
1、如果是仅仅检测原核蛋白是否有表达，可以直接将菌体重悬于蒸馏水中，并使用SDS-PAGE的方法检测。
2、如果需要检测原核蛋白是否有可溶表达，则需要将菌体超声波破碎之后再检测是否有可溶表达。
3、所以检测原核表达蛋白不需要将菌体超声波破碎的。
超声法破碎细胞提蛋白质的具体步骤：
1、清洗后的的组织用搅切机切碎成小块，混悬在至少两倍体积的缓冲液内；
2、洗去培养液的细胞,混悬在至少两倍体积的缓冲液中；
3、将超声探头没入混悬液内，进行超声破碎，一般总超声时间约2min，分为几个周期，如4×30s，周期之间让样品在冰浴中冷却，总的过程不用加裂解液。

Answer 2

检测原核表达蛋白不需要将菌体超声波破碎的
如果是仅仅检测原核蛋白是否有表达，可以直接将菌体重悬于蒸馏水中，并使用SDS-PAGE的方法检测。如果需要检测原核蛋白是否有可溶表达，则需要将菌体超声波破碎之后再检测是否有可溶表达。
所以检测原核表达蛋白不需要将菌体超声波破碎的

Answer 3

检测原核表达蛋白不一定要将菌体超声破碎，需要视你的具体需求而定。
一般原核表达外源蛋白，有两种路径：1. 包涵体表达；2.可溶性表达。
包涵体表达在菌体内，需要将菌体进行裂解，后通过变性复性系列操作可以获得表达的蛋白；可溶性表达又有两种：其一是菌体已经将部分可溶性表达蛋白分泌到菌体外，可以直接检测培养基内是否有目标蛋白；另一种是以可溶性蛋白形式在胞间质或胞内存在，可以使用裂解的方法破碎细胞，进行检测。